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本研究以哑铃状Au-Fe3O4纳米粒子(Au为可修饰部分,Fe3O4为磁性部分)为载体,将具有微生物特异性的糖链偶联到Au表面,旨在获得可与微生物特异性结合的功能化磁性糖纳米粒子,并以之为工具发展一种便捷的微生物分离富集技术。
本文着眼于乳糖(Lac)同蓖麻凝集素(RCA120)之间的相互作用,通过Lac-Au-Fe3O4与RCA120之间的高效结合,利用外加磁场成功的从目标水体中富集分离RCA120。因为微生物表面的粘附素多为凝集素类蛋白,本研究为进一步建立微生物的分离方法打下基础。主要研究内容包括:⑴Au-Fe3O4纳米粒子的制备。首先制备了直径为8 nm的金纳米粒子,再以金纳米粒子为种子,采用热分解法制备了兼具磁性和光学性质的油溶性哑铃状Au-Fe3O4纳米粒子,表面改性后,即得水溶性的双功能纳米粒子,通过TEM(透射电子显微镜)、XRD(X射线粉末衍射)、VSM(振动样品磁强计)对纳米粒子进行了表征。⑵功能化糖纳米粒子(Lac-Au-Fe3O4)的制备。综合考虑了表面修饰基团同Au-Fe3O4的键合能力、自组装特性、抗非特异性吸附及同RCA120的结合能力等因素,设计并合成了乳糖衍生物1(Lac-PEG6-(CH2)11-SH)。利用巯基(SH)同Au的键合,高效的将化合物1连接至纳米粒子表面,从而获得目标糖纳米粒子Lac-Au-Fe3O4。⑶Lac-Au-Fe3O4对RCA120的分离富集。将Lac-Au-Fe3O4与荧光标记的RCA120(FITC-RCA120)共孵育,利用外磁场将Lac-Au-Fe3O4与FITC-RCA120形成的复合物从溶液中分离,通过检测上清中剩余FITC-RCA120的荧光强度,确认了该技术能高效富集分离RCA120(100nmol/L FITC-RCA120富集率=72.8%)。