rhBMP7对原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖的影响

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目的建立原发性开角型青光眼(Primary open angle glaucoma,POAG)小梁网细胞体外原代培养体系;分析不同终浓度重组人骨形态发生蛋白7(Recombinationhuman bone morphogenetic protein,rhBMP7)对POAG小梁网细胞增殖的影响;探讨rhBMP7与POAG发生、进展的相关性。方法取临床确诊为POAG的患者,行小梁切除术(术中未使用丝裂霉素),切除的含小梁网组织的深层巩膜组织块,运用组织块培养法,进行体外POAG小梁网细胞原代及传代培养,将传3代POAG小梁网细胞,通过倒置显微镜、免疫细胞化学等方法观察体外培养细胞形态、生长特性及生物学特征等,鉴定体外培养细胞类型;将终浓度为0ng/ml(对照组)、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的rhBMP7无血清培养基,处理传3代POAG小梁网细胞及经CFDASE标记的传3代POAG小梁网细胞,采用CCK8法、荧光显微镜、流式细胞仪等方法,检测不同终浓度rhBMP7的无血清培养基对POAG小梁网细胞增殖的影响。结果1.组织块贴壁约10天左右,可见细胞从其边缘爬出,呈圆形、梭形、多角形等,通过细胞传代培养、倒置显微镜观察、免疫细胞化学抗原表达检测,证实体外培养细胞为POAG小梁网细胞;2.运用CCK8法检测发现:经终浓度为0ng/m(l对照组)、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的rhBMP7无血清培养基处理后,POAG小梁网细胞吸光度(OD值)分别为:0.5612±0.0269、0.7242±0.0393、1.4160±0.0162、1.7404±0.0392、1.8538±0.0145、1.9364±0.0546;实验组细胞增殖率分别为1.37%、2.96%、3.70%、3.96%、4.15%;实验组与对照组之间及各实验组之间增殖差异具有统计学意义P<0.05;3.荧光显微镜观察示:经CFDA SE标记的POAG小梁网细胞,随着rhBMP7终浓度的增加,细胞量及密度增加,且荧光染色逐渐减弱;4.采用流式细胞仪检测经0ng/ml(对照组)、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml终浓度rhBMP7无血清培养基干预的POAG小梁网细胞,与0ng/ml(对照组)相比,各处理组分裂、增殖细胞所占比例分别为:17.85%、18.63%、20.10%、27.45%、72.41%;随着rhBMP7终浓度增加,荧光强度逐渐减弱。结论rhBMP7在一定程度上,可促进POAG患者小梁网细胞的增殖,且在一定范围内呈剂量-时间依赖性。
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