【摘 要】
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1:AP-2基因家族是一类非常重要的转录激活因子,现已克隆成功的成员有AP-2α,AP-2β,AP-2γ和AP-2δ.我们将人的AP-2β基因插入酵母双杂交系统中的PDB-Leu载体中,将AP-2β融合
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1:AP-2基因家族是一类非常重要的转录激活因子,现已克隆成功的成员有AP-2α,AP-2β,AP-2γ和AP-2δ.我们将人的AP-2β基因插入酵母双杂交系统中的PDB-Leu载体中,将AP-2β融合到转录激活因子(GAL4)氨基端的DNA结合结构域(DNA-bind domain,B D)上,得到的克隆PDB-Leu/AP-2β.所得克隆经测序,以确定其阅读框码的正确性.然后将正确的克隆质粒转化到酵母菌Mav203中,通过酵母双杂交方法从人乳腺癌细胞HeLa cDNA文库筛选与AP-2β基因家族相互作用的基因.用此诱饵蛋白筛选到阳性克隆,所得阳性克隆经蓝斑试验进一步验证,所得阳性克隆只有2个能使X-gal变成蓝色.将所筛选的基因抽提出来,经过测序,所得测序结果分析,得知两个基因分别为CK2,GAS41.2:利用酵母双杂交技术已筛选到一个与转录激活因子AP-2β相互作用的酪蛋白激酶CK2.CK2是真核细胞保守的丝/苏氨酸激酶,是细胞生存的必要的,在细胞生长、增殖、分化的调控等方面起重要作用.我们的实验证实了重组的AP-2β和AP-2γ能在体外被酪蛋白激酶CK2特异性磷酸化.实验结果表明,酪蛋白激酶CK2在体内可能通过磷酸化对AP-2β和AP-2γ基因起调节作用.
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