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LuxR家族的蛋白是一类在细菌中广泛存在的调控因子,它能够与目的基因的启动子特异结合,调控相关基因的表达。 瓜类细菌性果斑病的病原菌为西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli),为革兰氏阴性菌(G-)。该病害能够为害西瓜、甜瓜等葫芦科作物,给我国的西甜瓜种植业造成了极大的经济损失。西瓜嗜酸菌群体感应系统的AacR(Aave-3810)为编码接受群体感应信号分子的蛋白,属于为LuxR家族。西瓜嗜酸菌的群体感应系统参与调控病菌的致病性、IV型菌毛、运动性、生长速度及生物膜形成能力。 为深入探索LuxR家族在西瓜嗜酸菌Ac-5菌中的调控作用,本论文利用同源重组双交换的原理,筛选了7个LuxR家族功能基因进行了缺失突变及互补菌株;通过致病力及相关生物学特性的比较分析,研究了其在西瓜嗜酸菌致病机制中的调控作用。 1.Ac-5菌株LuxR家族功能蛋白生物信息学分析 对西瓜嗜酸菌的全基因组分析结果表明,LuxR家族共包含了13个LuxR同源蛋白。其结构域组成共分为4种类型。通过氨基酸序列同源性比对发现,13个LuxR同源蛋白可以分成3组。 2.LuxR家族部分功能基因缺失突变株及互补菌株的构建 利用三亲交配的方法,筛选到LuxR家族7个功能基因的突变株及其相应的互补菌株,并验证其准确性。 3.Ac-5菌株LuxR家族部分基因缺失突变株及其互补菌株的致病力测定 致病力测定结果表明,突变株△luxR-1121,△luxR-3591、△luxR-3862、△luxR-4229及△luxR-4382致病力均显著下降(P<0.05)。西瓜嗜酸菌Ac-5菌株对西瓜幼苗的致病力明显高于甜瓜幼苗。 4.部分LuxR家族功能基因缺失突变株及互补菌株的生物学特性测定 分别对植物西瓜嗜酸菌野生型Ac-5菌株、各基因缺失突变株及对应的互补菌株进行了相关生物学特性测定结果表明,突变株运动能力显著下降(P<0.01),其中突变株△luxR-1121、△luxR-3862和△luxR-4382的运动能力基本缺失;经透射电子显微镜观察,突变株△luxR-4382不能形成鞭毛;qPCR实验结果发现,突变株中fliR, fliC基因的表达量都有不同程度的下降;蹭行运动测定结果显示,突变株△luxR-3591和野生型Ac-5菌株一样,能够在单菌落周围形成水纹状的蹭行运动轨迹,而其它突变株丧失蹭行运动的能力;生物膜形成能力的对比研究发现,突变株△luxR-3591与野生型Ac-5菌株均不能形成生物膜,其它突变株生物膜形成能力增强。