电针足少阳经穴对骨质疏松大鼠OPG、RANKL及CBFα1mRNA表达的影响

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目的:本实验旨在通过电针足少阳经穴干预骨质疏松大鼠后,观察分析骨组织相关因子OPG/RANKL mRNA和CBFa1mRNA表达的变化情况,以初步探讨其作用的分子基础和机制。方法:实验动物为12月龄Wistar雌性大鼠40只,体重(220±10g),由泸州医学院动物中心提供。实验期间所有大鼠均饲养在二级动物室,温度(25±1)℃,喂食正常饲料,自由饮水。按完全随机分组法将40只大鼠随机分为四组。假手术组(Sham group)、模型对照组(OVX Control group,OVX-C)、模型加胆经组(OVX acupuncture group,OVX-A)、模型加非经穴针刺组(OVX Nonpoint Acupuncture group,OVX-N),10只/组。假手术组仅行双侧开腹手术不摘除卵巢。其余各组施行手术摘除双侧卵巢术。手术后所有动物在同一条件(室温19~24℃,相对湿度40%左右)用普通饲料饲养,自由饮水。手术后三个月开始针刺OVX-A组:阳陵泉、环跳、悬钟、京门穴,均施以提插捻转平补平泻手法后加以电针刺激,留针30分钟,10次为一个疗程,每天施针一次。一个疗程完后休息五天,再继续下个疗程,共针刺6个疗程。OVX-N组选大鼠后肢内侧非经穴处(双侧),常规消毒后以毫针快速进针后施以平补平泻手法快速取针。Sham组、OVX-C组不作针刺。干预3个月停止干预再观察3个月后,处死前一天分别置大鼠于代谢笼中,收集24h空腹尿液,置-20℃低温冰箱保存待测。处死前用电子台秤称其重量。全麻下心脏采血,血清分离保存待测,快速取左侧股骨,仔细剔尽附着的软组织,置于冻存管内,置于-70℃低温冰箱保存待测。结果:1、造模3月、干预3月、观察3月后,电针胆经经穴组OPG mRNA表达较模型组和假手术组OPG mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);电针胆经经穴组OPG mRNA表达与非经穴组比较无统计学差异(P>0.05);模型组OPG mRNA表达与假手术组之间比较无统计学差异(P>0.05)。2、电针胆经组RANKL mRNA表达较模型组明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01),与非经穴组比较差异无统计学意义(P>0.05);非经穴组RANKL mRNA表达较模型组降低,差异有统计学意义;模型组RANKL mRNA表达较其余三组均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。3、电针胆经组OPG/RANKL mRNA的比值较假手术组降低明显,差异有显著统计学意义(P<0.01),较非经穴组和模型组无统计学意义(P>0.05);非经穴组和模型组之间比较无统计学意义(P>0.05);非经穴组较假手术组降低,差异有统计学意义(P<0.01);模型组与假手术组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。4、电针胆经组CBFa1mRNA表达明显高于假手术组,差异有显著统计学意义(P<0.01);电针胆经组CBFa1mRNA表达高于非经穴组,差异无统计学意义(P=0.507),高于模型组,差异无统计学意义(P=0.389);非经穴组与假手术组比较增高,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与非经穴组之间无统计学差异(P>0.05)。结论:1、电针足少阳经穴具有抑制骨吸收同时刺激骨形成的作用:电针少阳通过抑制破骨细胞关键调控因子OPG和RANKL的mRNA表达,提高OPG/RANKL两者比值,抑制骨吸收;同时刺激成骨细胞骨形成特异性基因CBFa1mRNA表达,增强骨形成,以促进OB和OC相偶联,进而达到和调骨重建的作用。2、电针足少阳刺激成骨细胞骨形成特异性基因CBFa1mRNA表达增加的同时,又不增加RANKLmRNA的表达,这可能是另外的因子如NFATc1在发生作用,而这个因子的作用有待于作进一步的研究。
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