鳗弧菌pEIB1质粒缺失株MVAV6201的筛选和培养

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鳗弧菌是世界上海洋和淡水鱼类动物流行病的主要病原体之一.它可导致一种对许多鱼类高度致死性的出血性败血病.在高密度水产养殖中,弧菌病将引起大量鱼体的死亡,从而给渔业养殖造成巨大的经济损失.利用减毒活疫苗防止鱼类病害具有许多突出的优势,它也是国际上的主要研究热点.该论文以海洋病原菌鳗弧菌Vibrio anguillarum MVM425(O1型)为出发菌株,通过变温培养诱变得到pEHB1质粒(pJM1类质粒)缺失株MVAV6201.对MVAV6201的初步减毒效果和免疫学评价表明:MVAV6201具有显著的低毒性和免疫保护性.通过摇瓶培养对MVAV6201的培养基进行了优化,并发现柠檬酸铁铵能有效增强MVAV6201对三价铁营养的吸收,促进菌体细胞的生长.细胞生长的柠檬酸铁铵饱和浓度为0.4 mmol/L.在5L反应器中,通过分批培养和连续培养发现乙酸是菌体生长的主要代谢副产物,乙酸的生成和细胞的比生长速率、溶解氧和pH均有关.MVAV6201对乙酸高度敏感,4g/L的乙酸能完全抑制细胞的生长.恒溶解氧法脉冲补料分批培养有利于细胞高密度的培养.控制脉冲补糖浓度1 g/L能避免乙酸积累,并取得了最大细胞密度51.6(O.D550)的较好结果.
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