木材腐朽菌的DNA提取及PCR检测研究

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木材腐朽就是木材本身的细胞壁在真菌的作用下逐渐发生分解,进而导致其出现糟烂或者解体,主要是由能够对木材进行入侵腐蚀的真菌的生长代谢而造成。木材的节约利用是当今社会有效发展循环经济、塑造成节约型社会的重要要求,想要从根本上解决问题则需找到腐蚀原因。木材腐朽在多数的情况下是由对木材本身具有腐蚀能力的相关真菌的生长繁殖所造成的,这种真菌主要可以分为三类:霉菌、变色菌、木材腐朽菌。木材腐朽菌种类繁多,可分为白腐菌、褐腐菌和软腐菌三类。其中,木材白腐菌在木材腐朽菌中的比例最大,而且能够降解木材中的大部分成分,是目前明确报道的菌株中能够在纯培养过程中彻底降解木质素的唯一类微生物,所以这类菌株对多种毒害、不易降解的化合物具有非常强的降解能力,因此具有非常显著的生物降解能力。白腐菌的生理代谢过程比较复杂,在适宜条件下菌丝的生长过程中菌丝体的生长较为旺盛并为多核,因真菌的基因组提取受到多种条件的限制,因此对总基因组DNA的提取方法进行研究是对该菌类生物学机制的研究基础,而且也能为后期的改造与研究提供帮助,同时获得DNA的质量也会影响接下来的PCR扩增。利用PCR技术对菌株进行鉴定具有简单、快速、高效、准确、无污染等多个优点,因此深受广大专家学者的喜爱。本文首先对从腐朽的木材上分离获得木材腐朽菌,对其进行培养并进行形态学的初步鉴定,再通过分子生物学领域PCR法对其进行有效性鉴定,对其进行综合的比对分析,从而获得较为准确的菌种相关信息。经过研究获得以下结果:(1)通过对木材腐朽真菌的子实体进行采集和组织块的切取,对其进行消毒,划线,分离及纯化获得较为纯的真菌,并对其进行最基本的形态学分析,生长较快,呈现毛绒状等特点。(2)通过分别采用蜗牛酶法、CTAB法、SDS法和蛋白酶K对木材腐朽真菌的全基因进行提取,且对提取的DNA进行紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳(AGE)检测,进行不同种提取方法结果的比较,经实验发现,蜗牛酶法、CTAB法、SDS法提取DNA纯度较蛋白酶K法较低。最终获得一种最有效的白腐真菌总DNA的提取方法为蛋白酶K法提取DNA的纯度为1.96。(3)利用设计通用性和特异性引物进行PCR产物的扩增,对扩增的产物进行纯化回收,DNA测序,进行相关序列的比对,进行分析,再进行形态生物学的观察和分析,从宏观和微观两个层面具体分析,获得结论为:木材腐朽真菌1为香栓菌,木材腐朽菌2为毛栓菌。
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