研究背景和目的甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）是呼吸道感染的重要病原体,不仅引起季节性流感,还引起流感大流行。IAV容易发生抗原变异,导致新型流感病毒的产生,并对人类健康构成全球性威胁。接种疫苗能有效的预防和控制流感,但其有效期短,效价低,因此,抗病毒药物是治疗流感的重要选择。目前,食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）已批准三种类型的抗病毒药物用于预防和治疗流感,但是耐药病毒株限制了抗流感病毒药物的防治效果,因此,迫切需要开发具有新颖作用机制的抗流感药物。前期研究表明,中药鹅不食草的倍半萜内酯brevilin A在体外具有较好的抑制A/PR/8/34 H1N1（PR8）活性。本论文在前期研究基础上进一步研究brevilin A的体内抗流感病毒效果、其抗病毒谱和抗病毒作用机制。实验方法和结果首先,我们构建流感病毒PR8感染小鼠模型,检测给予brevilin A后对感染小鼠的体重及存活率的影响,结果表明,brevilin A显著改善小鼠的体重并提高存活率至50%（病毒对照组小鼠死亡率为100%）。然后,我们采用空斑减数实验检测了brevilin A对几种IAV病毒株的体外抑制作用,结果显示brevilin A可以显著抑制不同的IAV亚型,对PR8、A/FM/1/47H1N1（FM1）、A/Hong Kong/498/97 H3N2（HK498）和A/chicken/Guangdong/1996H9N2（Gd1996）的EC₅₀分别为2.96±1.10、1.60±1.14、3.28±1.09和2.07±1.12μM。为了评估brevilin A对各种流感病毒或病毒滴度的生长曲线的影响,通过空斑实验测定多个复制周期内不同时间点的病毒滴度,我们发现brevilin A对高低滴度IAV不同亚型子代病毒的产生均有显著抑制效果,最多降低约10倍。采用空斑实验和免疫荧光法检测brevilin A作用于流感病毒哪个复制阶段,结果显示brevilin A主要作用于IAV复制的4-8 hpi。于是我们采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验进一步分析了brevilin A对病毒信使RNA（Messenger RNA,mRNA）、病毒RNA（Viral ribonucleic acid,v RNA）和互补RNA（Complementary RNA,c RNA）合成的影响,与病毒对照组相比,brevilin A处理组中v RNA显著降低。我们同时进行了免疫印迹实验（Western blotting）以检测brevilin A对病毒蛋白表达的影响,结果显示,与病毒对照组相比,brevilin A处理组中,M1、M2、NS1和NS2蛋白水平有不同程度的降低,其中,M2和NS2蛋白表达降低至70%。而M1、M2、NS1和NS2蛋白是由M和NS mRNA的可变剪接而翻译产生。接下来我们通过RT-qPCR实验检测了brevilin A对M1、M2、NS1和NS2 mRNA合成的影响,与病毒对照组相比,brevilin A处理组中,M1、M2、NS1和NS2mRNA水平有不同程度的降低,M2 mRNA表达水平降低最显著,减少约55-60%。我们接下来进行了激光共聚焦免疫荧光实验,以评估brevilin A对病毒核糖核蛋白复合物（Viral ribonucleoprotein,v RNP）出核的影响,结果显示,与病毒对照组相比,brevilin A影响IAV v RNP的出核。结论Brevilin A在体内、外具有抗IAV活性。作用机制研究表明,brevilin A在三个方面抑制流感病毒复制,包括v RNA合成、病毒mRNA的表达以及由M和NS片段编码的蛋白以及vRNPs的核输出。这些结果为探索与brevilin A具有相似结构的倍半萜内酯作为潜在的抗流感治疗奠定了基础。