论文部分内容阅读
目的:胰腺癌为医学界最难攻克的癌症之一,而分子靶向治疗是当下研究的热门。本课题以氨肽酶N为靶点,制备抗肿瘤药物阿霉素聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺纳米颗粒(PEG-PE),并用NGR多肽修饰。并测定其载药量,包封率及纳米颗粒粒径等,同时研究NGR靶头基修饰的阿霉素纳米颗粒(DOX-PEG-PE)对人源胰腺癌细胞SW1990细胞的抑制作用,及其对裸鼠胰腺癌的治疗效果。方法:1.制备阿霉素聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺(DOX-PEG-PE)纳米胶束:以PEG2000-DSPE和Mal-PEG3500-DSPE为膜材,利用薄膜分散法将盐酸阿霉素包入,然后水化成胶束。2.将制成的纳米胶束利用聚合反应与NGR多肽连接,得到NGR靶头基修饰的阿霉素胶束,再利用高效液相测定其载药量与包封率,观察透射电镜下的胶束形态及利用激光粒度分析仪测定粒径大小。3.体外实验:(1)首先将人源胰腺癌细胞SW1990利用Luc转基因的方法进行转染,利用MTT法对相同浓度,相同时间点的市售阿霉素组、未连接NGR多肽的阿霉素胶束组和NGR多肽修饰过的阿霉素胶束组进行测定,比较其对细胞抑制率的不同。(2)通过流式细胞术和激光共聚焦实验来测定市售阿霉素组、阿霉素胶束组及NGR多肽修饰的阿霉素胶束组进入细胞能力的不同。4.胰腺癌原位模型的建立:利用异戊巴比妥,通过尾静脉注射的方法麻醉,从左上腹直肠旁线处纵行切开1cm左右切口,并仔细分开胃与脾之间的薄膜,将胰腺暴露,再用胰岛素注射器将事先准备好的浓度为5×106个/ml的细胞悬液直接注入胰头部近脾的门脉处,再将胰腺送回腹腔,用6-0号外科手术缝合线将腹壁肌层和皮肤缝合。裸鼠并无死亡及伤口感染情况发生,胰腺癌模型建立成功。5.体内实验:将建立好的胰腺癌原位模型随机分为4组,分别为生理盐水组、市售阿霉素组,阿霉素胶束组和NGR组,每组分别给予相对应的药物,每3天给药一次,共给药3次。给药期间每天观察体重变化情况。给药结束后将裸鼠处死,解剖后观察肿瘤大小情况。结果:NGR靶头修饰的阿霉素聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺纳米胶束的载药量为10.98%,包封率为97.62%。纳米胶束的粒径为15-20nm。体外实验结果示:在相同给药浓度与相同给药时间点的情况下,NGR靶头组进入细胞的能力与抑制SW1990lue细胞生长的能力明显高于其余各组。并且在体内实验中,解剖裸鼠后发现NGR靶头组的肿瘤体积也明显小于其余各对照组。统计学检验与其余各组有统计学差异(P<0.05)。结论:以氨肽酶N为靶点,NGR靶头基修饰的阿霉素聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺纳米胶束(DOX-PEG-PE)相对于市售阿霉素和阿霉素胶束能更有效的抑制裸鼠SW1990luc胰腺癌的增长,并且毒副作用相对较小,为胰腺癌的分子靶向治疗提供了更广阔的前景。