研究背景:宫颈癌是女性中常见的癌症之一,在女性的癌症发生率中排名第四。90%以上的宫颈癌由持续感染高危型人乳头瘤病毒（HPV）引起,其中高危型HPV16和18对宫颈癌的致癌性最强。除了降解抑癌因子p53,HPV E6还能与KDM5C结合形成E6-E6AP-KDM5C复合物,以泛素依赖的方式降解KDM5C,激活癌基因EGFR和c-MET的超级增强子,促进宫颈癌的发生发展;此外,HPV E6通过上调糖基转移酶的表达,提高细胞的蛋白质糖基化水平,促进癌基因的表达,增强HPV的致癌活性。BET（bromo and extra-terminal,BET）蛋白家族是一类重要的基因转录调控因子,并与肿瘤的发生密切相关。其bromo功能域通过和乙酰化修饰的转录因子或者组蛋白结合招募转录复合物蛋白到DNA转录调控元件,是重要的肿瘤治疗靶点,相关抑制剂作为靶向药物已进入临床实验,但其在宫颈癌的治疗中效果不一;顺铂（DDP）是目前临床治疗宫颈癌的常用药物,抗癌谱广,可与多种抗肿瘤药物协同作用,但是容易使肿瘤细胞产生耐药性,这也是导致宫颈癌化疗失败的主要原因之一;6-diazo-5-oxo-L-norleucine（DON）是一种谷氨酰胺拮抗剂,可以通过抑制己糖胺生物合成通路中的关键限速酶的活性,降低细胞O-糖基化水平,是一种常用的糖基化抑制剂。研究目的:探索在感染高危型HPV的宫颈癌细胞中,KDM5C蛋白水平的降解是否与宫颈癌治疗中BET抑制剂的有效性和化疗药物的耐受性有关,以及BET抑制剂与化疗药物联合使用能否增强治疗效果,并初步探索糖基化抑制剂在宫颈癌治疗中的应用。研究方法:1)利用CRISPR Cas9基因编辑技术在宫颈癌细胞系C33A、Caski、Si Ha、He La中建立敲除KDM5C基因的稳定转染细胞系;在获得的稳定细胞系中检测KDM5C的蛋白水平,鉴定稳定转染细胞系是否构建成功;2)分别用BET抑制剂JQ1和OTX-015、化疗药物DDP处理野生型宫颈癌细胞和敲除KDM5C基因的宫颈癌细胞,联合使用JQ1和DDP处理野生型宫颈癌细胞,使用CCK8检测细胞增殖情况;3)使用DON处理野生型宫颈癌细胞和敲除KDM5C基因的癌细胞,使用CCK8检测细胞增殖情况。研究结果:CCK8结果显示,宫颈癌细胞对于BET抑制剂的反应不一,用BET抑制剂和DDP处理宫颈癌细胞后,与野生型宫颈癌细胞相比,敲除KDM5C基因后的细胞对BET抑制剂和DDP的敏感性没有增加;用JQ1和DDP联合处理野生型宫颈癌细胞后,与单独用DDP相比,细胞对DDP的敏感性没有增加;宫颈癌细胞对于DON处理有较好的响应,敲除KDM5C基因后细胞的糖基化水平上升,与野生型宫颈癌细胞相比,敲除KDM5C基因后的细胞对DON更耐受。研究结论:在HPV感染的宫颈癌细胞中,KDM5C蛋白水平的降解与细胞对JQ1敏感性无关,也与细胞对DDP产生耐药性无关,但是提高了细胞对DON的耐受性。这说明在HPV感染的宫颈癌细胞中,虽然KDM5C蛋白水平的降解与宫颈癌治疗的靶向药物和化疗药物的耐受性无关,BET抑制剂与化疗药物联合使用也不能增强治疗效果。但是,KDM5C蛋白水平的降解提高了细胞对糖基化抑制剂的耐受性,可能可以作为宫颈癌的治疗靶点。