目的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC),是一种常见的非特异性肠道疾病,影响其发病的因素很多,其中免疫因素占主导地位,所以也把溃疡性结肠炎归为自身免疫性疾病。TNBS/乙醇溶液诱导的小鼠实验性结肠炎,病理特点及发病机制与溃疡性结肠炎近似。大黄牡丹汤出自张仲景的《金匮要略》,由大黄12g、丹皮9g、桃仁12g、冬瓜子30g和芒硝9g组成,具有泻热破瘀,消肿散结的功效,是治疗肠痈初期的经典方。大黄牡丹汤对实验性结肠炎小鼠的实验研究及其主要成分大黄酸、丹皮酚抗炎、抗氧化和调节免疫等方面的药理机制,提示大黄牡丹汤醇提液对小鼠结肠炎可能也有较好的治疗效果。因此本研究的主要目的是旨在采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱发小鼠结肠炎模型,观察大黄牡丹汤醇提液对结肠炎小鼠一般情况和结肠黏膜病理学变化的影响,判断其治疗作用,并检测小鼠不同部位Treg细胞数量、外周血血清细胞因子TGF-β和IL-10水平、粘膜sIgA数量及脾脏淋巴细胞增殖指数在治疗后的变化情况,以探讨大黄牡丹汤醇提液对小鼠结肠炎治疗作用的免疫机制。在上述基础上,为更好地了解大黄牡丹汤醇提液的免疫功能,本研究还对大黄牡丹汤醇提液的其他相关免疫功能进行探讨。方法1.采用]TNBS/乙醇溶液诱导、建立小鼠实验性结肠炎模型,通过疾病活动指数、大体损伤评分、组织病理学评分对模型进行评价。2.实验性结肠炎小鼠连续6d灌胃给予高、中、低剂量的大黄牡丹汤醇提液以进行干预治疗,并设计空白对照(灌服PBS)和阳性对照(灌服柳氮磺胺吡啶)。观察小鼠的一般行为、参照文献方法进行DAI评分、肉眼评分。第6d取小鼠结肠组织,检查黏膜病变情况,剪取溃疡组织放入10%中性甲醛溶液中固定、石蜡包埋、组织切片(4μm)、HE染色,显微镜下观察、进行组织病理学评分。3.实验性结肠炎小鼠用大黄牡丹汤醇提液干预治疗后,采用MTT法检测脾淋巴细胞体外经ConA刺激后的增殖反应能力；利用ELISA检测肠粘膜sIgA的分泌水平。4.实验性结肠炎小鼠用大黄牡丹汤醇提液干预治疗后,通过的流式细胞技术,测定小鼠外周血、派氏结、肠系膜淋巴结和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量；采用ELISA方法测定小鼠血清中TGF-β、IL-10的水平。5.在上述基础上,为更好地了解大黄牡丹汤醇提液对小鼠免疫功能的影响,本研究还通过环磷酰胺腹腔注射法诱导建立小鼠免疫抑制模型,免疫器官重量法测定小鼠脾脏指数和胸腺指数；碳粒廓清实验测定小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能；血清溶血素生成实验检测小鼠体液免疫功能；二硝基氟苯(DNFB)诱导建立小鼠迟发型超敏反应(DTH),检测小鼠细胞免疫功能。结果1.小鼠造模后大体评分、DAI评分和病理学评分均明显升高；经大黄牡丹汤醇提液干预治疗后上述指数有不同程度的下降,显示出一定的治疗效果。2.同时,大黄牡丹汤醇提液各剂量可以提升结肠炎小鼠肠道分泌sIgA的水平,增强ConA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞增殖分化的能力。3.大黄牡丹汤醇提液各剂量可以提升结肠炎小鼠外周血、派氏结、肠系膜淋巴结和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量,增加小鼠血清中TGF-β、IL-10的水平。4.此外,大黄牡丹汤醇提液各剂量组可升高免疫抑制模型小鼠的胸腺指数和脾脏指数,可不同程度提高免疫抑制模型小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能,可升高免疫抑制模型小鼠血清中溶血素的水平,可提高免疫抑制模型小鼠迟发型超敏反应的水平。结论1.大黄牡丹汤醇提液对TNBS/乙醇混合液法建立的实验性结肠炎小鼠有一定的治疗作用,对其免疫功能具有增强作用；其机制可能与提高外周血、派氏结和肠膜淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例和升高外周血中TGF-β和IL-10含量有关。2.大黄牡丹汤醇提液还可改善腹腔注射环磷酰胺引起的小鼠非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能的低下的状态,显示出多种免疫调节功能。