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目的:研究自噬在鱼藤酮(Rotenone)诱导的SH-SY5Y细胞损伤中的作用,初步探讨自噬、α-synuclein以及组蛋白脱乙酰基酶(histone deactylase 6,HDAC6)三者之间的关系及在帕金森发病(Parkinson’s disease ,PD)中的作用机制。方法:采用Rotenone处理人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型, WST-1法测定Rotenone对SH-SY5Y细胞增殖活性的抑制作用;免疫荧光和Western blot检测SH-SY5Y细胞中自噬相关蛋白LC3以及α-synuclein、HDAC6的表达情况。运用免疫荧光和Western blot检测自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和激活剂雷帕霉素(Rapamycin)对α-synuclein在细胞内蓄积的影响,以及LC3和HDAC6表达的变化。结果:100nM Rotenone对细胞生长活性几乎没有抑制作用,但光学显微镜检测发现形态学发生变化;免疫荧光结果显示Rotenone给药后,α-synuclein增多并聚集,且在核周形成聚集小体,LC3与HDAC6显著上调,同样也形成类似聚集小体的结构;Western blot的结果显示Rotenone给药后,α-synuclein与LC3的表达随着时间的变化,呈现出先增多后减少的趋势;免疫荧光双标记结果显示,含α-synuclein的聚集小体与HDAC6蛋白共表达, LC3与α-synuclein、HDAC6与LC3也存在共表达现象;在Rotenone给药前预先加入3-MA,WST-1结果显示细胞生长活性明显受到抑制;免疫荧光结果显示α-synuclein表达增多其聚集现象更加明显,而HDAC6在一定程度上表达减少; Western blot结果显示α-synuclein随时间的变化呈现相对高的水平;在Rotenone给药前预先加入Rapamycin,免疫荧光与Western blot结果显示α-synuclein表达减少;而HDAC6表达增高。结论:Rotenone能提高细胞的自噬水平,诱导SH-SY5Y细胞中的α-synuclein表达增加与聚集以及Lewy bodies的形成;含α-synuclein的聚集小体与HDAC6蛋白共表达,表明HDAC6也是Lewy bodies的一个重要组成部分;自噬是α-synuclein代谢的主要途径;增强自噬,可以加速α-synuclein的清除;HDAC6的应答机制可能依赖于自噬。