产纤维素酶海洋微生物的筛选及其产酶优化与酶学性质初步研究

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纤维素是地球上存量最为巨大的生物可再生资源,使用其生产能源物质对人类未来发展的可持续性具有重要意义。纤维素酶能够将纤维素催化水解转化成葡萄糖,可为后续生产生物燃料提供原料。产纤维素酶的生物具有广泛性和多样性,微生物、动物甚至植物都有能产生纤维素酶的种属。纤维素酶的应用十分广泛,在食品、畜牧、纺织、造纸等行业都有很好的应用。海洋环境的特殊性使得海洋微生物能够产生具有新特性的酶。对海洋微生物资源的开发与利用可以极大的丰富微生物酶资源库。本研究从舟山市桃花岛附近海域采集的样本中筛选出一株能够产纤维素酶的放线菌。根据菌落形态、生理生化特征和16S基因序列的比对确定该菌是密旋链霉菌Streptomycespactum。对该菌的液体发酵产酶进行了优化研究。发现该菌发酵的最适碳源和氮源分别为麸皮和NH4NO3,然后对培养基组分进行显著性分析,发现麸皮、K2HPO4、吐温-80是影响产酶的显著因素。对这三个显著因素进行了响应面分析,根据分析结果确定了最佳的培养基成分。同时又结合遗传算法通过BP人工神经网络方法优化了培养基组分。最后基于最佳配比培养基研究确定的发酵条件为:发酵温度30℃,接种量5%,摇瓶装液量70mL/150mL,转速200r/min,起始pH7,在168小时酶活达到最高值为0.455 U/mL,酶活提高了 97.82%。对该菌液体发酵所得的酶液进行了浓缩、硫酸铵分级沉淀、脱盐处理后得到初步纯化的纤维素酶液。对该酶液的CMC酶活性质的研究表明显示,该酶最适反应温度为60℃,在pH6-7有最高的酶活性,一定浓度(≤0.6%)的NaCl对酶活有提高作用,在NaCl浓度为2%的情况下酶活比不含NaCl的情况下提高了1.19倍;50℃以下酶的稳定性良好;低浓度(5mmol/L)的K+、Mg2+、Zn2+对酶活有促进作用,Fe2+、Cu2+、Co2+、Mn2+有较强的抑制酶活作用,高浓度(10mmol/L)时K+、Mg2+对酶活有促进作用,Fe2+、Cu2+、Co2+、Mn2+对酶有抑制作用,该酶具有良好的耐碱性、耐热性和耐盐性,在工业应用领域有一定的应用前景。
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