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目的:体外纯化、扩增和鉴定人嗅粘膜间充质干细胞(Human olfactory mesenchymal stem cells,h OM-MSCs),以hOM-MSCs和关节液共培养进行诱导分化实验,以转化生长因子-β3(Transforming growth factor beta 3,TGF-β3)作为阳性对照组,完全培养基作为阴性对照组,初步探索关节液诱导hOM-MSCs向软骨细胞分化能力。方法:(1)将hOM-MSCs贴壁培养传代纯化、进行流式细胞技术检测干细胞标记物表达情况及干细胞特异性免疫荧光染色。(2)将P4代hOM-MSCs分为3组进行诱导培养,关节液组(hOM-MSCs+1 ml关节液+2 ml10%FBS的DMEM/F12培养基);TGF-β3组(hOMMSCs+TGF-β3的混合培养基);对照组(hOM-MSCs+10%FBS的DMEM/F12培养基)。(3)将以上分组细胞接种96孔板进行CCK-8实验,在酶标仪上测定各孔吸光度值,绘制24-72h细胞生存曲线观察细胞增殖情况。(4)采集三组第7,14,21d细胞图像观察形态变化,诱导21d后,取出细胞玻片,进行免疫荧光染色、阿尔新蓝染色分别观察细胞合成二型胶原(Type II collagen,COL II)、糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)情况进行软骨细胞定性分析。(5)诱导21d后通过Westen Blot、RT-qPCR技术检测四种经典软骨细胞标记物SOX9(Sex determining region Y-box 9)、COL II、COL I(TypeI collagen)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan/ACAN)的表达进行软骨细胞定量分析。结果:(1)经流式细胞技术鉴定hOM-MSCs的细胞表面标记CD34、CD45呈低表达,细胞表面标记CD73、CD90、CD105呈均一且高表达,符合干细胞表面CD分子标志特性且细胞纯度达97%以上,且STRO-1、Nestin荧光染色呈阳性。(2)经CCK-8法检测24-72 h三组培养液均对hOM-MSCs具有增殖作用,且随着培养时间的延长关节液组与对照组的细胞增殖情况较TGF-β3组的细胞增殖情况更佳。(3)hOM-MSCs经过21d的分组培养、诱导后形态学发生了改变,通过COL II免疫荧光染色和阿尔新蓝染色检测软骨细胞染色呈阳性,关节液组和TGF-β3组均能诱导形成软骨细胞。(4)通过Westen Blot、RT-qPCR技术定量分析SOX9、COL II、COL I和ACAN发现关节液组和TGF-β3组均软骨特异性表达呈阳性,均能诱导形成软骨细胞,且关节液组较TGF-β3的分化潜能更强。结论:1.关节液能诱导hOM-MSC向软骨细胞分化;2.关节液诱导hOM-MSCs向软骨细胞分化促进作用强于TGF-β3。