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目的:用柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)感染体外培养的Hela细胞,观察CVB3感染对Hela细胞形态及凋亡变化的影响,以及对4EBP1表达的影响,探讨细胞凋亡及4EBP1表达在CVB3感染中的意义。
方法:以CVB3分别感染未饥饿及饥饿Hela细胞,观察细胞形态学变化,并以膜联蛋白V(FITC-Annexin V)联合PI染色双参数技术(Annexin V/PI法)定量检测饥饿Hela细胞凋亡变化,RT-PCR法及Real-time PCR法检测未饥饿及饥饿Hela细胞中4EBP1的表达,应用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析,P<0.05为差异有统计学意义。
结果:⑴Hela细胞形态学变化:CVB3感染Hela细胞后,可引起细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),光镜下细胞形态发生改变,细胞变圆变暗,漂浮成空泡状或呈葡萄串样聚集。⑵Hela细胞的凋亡变化:CVB3感染Hela细胞后,细胞出现凋亡变化,病毒组各时间点Hela细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),且在一定时间段内凋亡程度随时间延长而增加。⑶RT-PCR及Real-time PCR检测未饥饿Hela细胞4EBP1表达:对照组及病毒组Hela细胞中均有4EBP1表达,病毒组与对照组各时间点比较,4EBP1表达减少(P<0.05)。且随病毒感染时间延长,4EBP1表达下降(P<0.05)。⑷RT-PCR及Real-time PCR检测饥饿后的Hela细胞4EBP1表达:对照组及病毒组Hela细胞中均有4EBP1表达,病毒组与对照组比较4EBP1表达降低(P<0.05),且随病毒感染时间延长,4EBP1表达下降(P<0.05)。⑸饥饿组与非饥饿组比较,非饥饿组4EBP1表达低于饥饿组(P<0.05),提示营养因素可影响4EBP1的表达。
结论:①CVB3感染Hela细胞后可使Hela细胞发生凋亡,并随着病毒感染时间的延长,细胞凋亡增多,提示细胞凋亡参与CVB3的致病机制。②病毒感染未饥饿的Hela细胞及饥饿后的Hela细胞后4EBP1表达均有下降,在一定范围内,随时间的延长下降更明显,提示4EBP1可能参与了抗细胞凋亡的过程。③营养因素可影响4EBP1的表达。