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树突状细胞(dendritic cell,DC)是专职的抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,APC),DC的成熟状态决定了T淋巴细胞应答并调控辅助T细胞(helper T cell,Th)亚型分化,成熟DC能够诱导产生抗原特异性细胞免疫反应,而不成熟DC能够诱导T细胞无能化或调节性T细胞。中草药及其组分可以通过调节DC的成熟状态调控免疫反应。课题组前期研究发现中亚苦蒿(Artemisia absinthium L.)醇提物具有免疫抑制作用。基于前期基础,本研究将中亚苦蒿醇提物经AB-8大孔树脂分离纯化,获得中亚苦蒿醇提物70%乙醇洗脱组分(A.absinthium component eluted by 70%ethanol with macroporous resin,AAEM-70%)。采用液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)对其进行成分分析,研究其对DC成熟的影响,通过Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析、硅胶柱层析等方法对其活性成分进一步分离纯化,筛选出一个功能组分AEM-SC(AAEM-70%separated by silica gel column),并通过流式细胞术、酶联免疫吸附法测定、抗原吞噬、混合淋巴反应、蛋白质免疫印迹,小鼠炎症模型等实验从体外、体内水平探究AEM-SC对DC成熟及功能的影响。主要研究结果如下:(1)AAEM-70%组分的分离纯化、成分分析及功能验证:将中亚苦蒿85%醇提物经AB-8大孔树脂柱层析分离,以水、30%乙醇、50乙醇、70%乙醇、85%乙醇、100%乙醇进行逐级洗脱,获得AAEM-70%组分。HPLC-MS检测结果显示,AAEM-70%含有萜类、黄酮类、类固醇等21类物质,通过总离子流色谱图分析,鉴定出正离子模式下含有163种化合物;负离子模式下含有132种化合物。AAEM-70%对门控细胞比例没有显著影响,显著抑制了细菌脂多糖(LPS)诱导的DC表面分子(CD40、CD80、CD86)的表达及炎症细胞因子(IL-6、IL-12p40及TNF-α)的分泌,并且提高了抗炎细胞因子IL-10的分泌水平,增强了DC的抗原吞噬能力。表明AAEM-70%抑制了LPS诱导的DC的成熟。(2)AEM-SC组分的分离纯化及体外、体内对DC成熟及功能影响:通过直接或有机试剂萃取后经Sephadex LH-20凝胶柱层析分离,或直接经硅胶柱分离等三种不同的方法对AAEM-70%进行分离,对比后筛选出硅胶柱层析分离效果较好,且获得一个功能组分AEM-SC。AEM-SC能够抑制DC的成熟,显著降低LPS诱导的DC表面分子及炎症细胞因子的表达,提高了DC摄取抗原的能力,降低了DC刺激小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的能力;降低了LPS诱导的MAPK信号通路中ERK、JNK、p38的磷酸化水平,以及NF-κB信号通路中IκBα的磷酸化水平。小鼠炎症模型实验发现,AEM-SC显著降低了LPS诱导的小鼠体内DC表面分子的表达及血清中炎症细胞因子的水平。AEM-SC在体外及体内均能够抑制DC的成熟,并具有抗炎作用。综上所述,中亚苦蒿醇提物AAEM-70%能够抑制LPS诱导的DC成熟,进一步分离获得的AEM-SC组分可能是通过MAPK和NF-κB信号通路抑制LPS诱导的DC成熟及炎症细胞因子表达,并且能够抑制LPS诱导的小鼠炎症反应,表明AEM-SC具有免疫抑制活性,是一种潜在的耐受佐剂,可以用于自身免疫疾病的治疗。