巴戟天炮制过程中化学成分变化规律的研究

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巴戟天,为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的干燥根,是广东省道地药材,也是我国著名的“四大南药”之一,具有补肾阳,强筋骨,祛风湿的功效,用于阳痿遗精,宫冷不孕,月经不调,少腹冷痛,风湿痹痛,筋骨痿软。巴戟天中所含的化学成分主要为蒽醌、寡糖、环烯醚萜等,具有抗抑郁、抗骨质疏松、抗氧化、抗炎、促进生精、促进血管生成、神经保护等多方面的药理作用。《中国药典》(2010年版)中巴戟天饮片有4种,包括巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天和制巴戟天。不同来源的巴戟天生药材外观形态及有效成分含量有较大差异,而且炮制会使巴戟天的化学成分发生变化,进而可能引起药材质量及疗效的改变,因此,巴戟天饮片质量标准的制订要充分考察不同产地、生长年限等因素的影响,以及生品与各炮制品的差异。巴戟天炮制后化学成分和药理作用均发生了变化,目前对炮制品与生品之间,即炮制前后主要化学成分的指纹图谱或含量变化研究较多,但发生在炮制过程中的化学成分的变化过程及规律却缺乏系统地研究。因此,本研究通过比较广东省不同产地、不同生长年限、不同品种的巴戟天蒽醌类成分高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的差异评价生巴戟天的质量,得出德庆县、3-4年生、小叶种巴戟天质量较优,以该条件下生巴戟天为原料,研究巴戟肉、盐巴戟天、制巴戟天在炮制过程中化学成分的变化规律,为巴戟天饮片质量标准的修订提供依据。主要研究内容如下:(1)巴戟天蒽醌类成分的高效液相色谱指纹图谱研究利用HPLC指纹图谱方法考察,确定巴戟天的色谱条件为:DiamonsilTM C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0~5 min,20%A;5~10 min,20%~44%A;10~40 min,44%A;40~50 min,44%~95% A;50~55 min,95%A);流速:1.0 mL/min;进样量:20μL;检测波长:277nm;柱温:30℃。巴戟天蒽醌类成分HPLC指纹图谱色谱峰丰富、分离度好、分析时间短,共有模式中得到20个共有峰,其中13号峰为甲基异茜草素-1-甲醚。分别比较了32个来自广东省不同产地、不同生长年限、不同品种的巴戟天指纹图谱,通过相似度评价和聚类分析等方法评价不同来源药材的质量,结果表明,德庆县高良镇所产巴戟天质量优良,采收年限以3-4年为佳;小叶种巴戟天蒽醌类成分含量较高,且产量高,为巴戟天优良品种;通过研究加工过程对巴戟天质量的影响,发现巴戟天抽去木心后易发霉,霉变后化学成分发生较大的变化,建议产地加工不抽木心晒干。(2)巴戟天炮制过程中蒽醌类成分的变化规律利用HPLC指纹图谱技术,以甲基异茜草素-1-甲醚及总蒽醌类化学成分为评价指标,考察巴戟肉、盐巴戟天、制巴戟天3种炮制品分别在不同蒸制时间、加盐量及盐蒸时间、甘草量及煎煮时间条件下蒽醌类化学成分的变化规律。结果表明,巴戟天炮制品中蒽醌类化学成分随加热时间和辅料的变化而变化,甲基异茜草素-1-甲醚在加热和加入辅料盐后均有增溶现象,但随着时间的延长,其含量逐渐下降;在加入辅料甘草后该成分明显下降;总蒽醌类化学成分在不同炮制过程中随着加热时间的增加和辅料盐、甘草的加入,其变化均为先上升后下降。研究结果可为巴戟天的炮制方法的修订提供科学依据。(3)巴戟天炮制过程中寡糖类成分的变化规律巴戟天寡糖类成分的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)色谱条件为:Waters XBridgeTMAmide(4.6mm×250 mm,3.5μm)色谱柱,流动相:0.2%三乙胺乙腈(A)-0.2%三乙胺水溶液(B),梯度洗脱(0~10 min,75~70%A:10~20min, 70%A;20~45 min,70~60%A;45~70 min,60%A);流速:0.8 mL/min;进样量:20μL;ELSD漂移管温度:75℃;氮气流量:2.0 L/min;柱温:35℃。采用HPLC-ELSD技术,以巴戟天中1-5糖链的寡糖(D-果糖、D-无水葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖)的含量及6-10糖链寡糖的峰面积为指标,考察巴戟肉、盐巴戟天在炮制过程中寡糖类成分的变化规律。结果表明,巴戟肉随闷润加水量和蒸制温度、盐巴戟天随辅料盐浓度的增加,其寡糖类成分均呈先上升后下降的趋势,巴戟肉和盐巴戟天中1-3糖链含量随蒸制时间的延长不断增加,而4糖链以上含量则不断下降,并产生了一系列随蒸制时间的延长峰面积不断增加的新成分。据此得出,巴戟肉的最佳闷润加水量为70 mL/100 g,蒸制温度为160℃,蒸制时间1 h,盐巴戟天最佳辅料盐浓度为3%,盐蒸时间为1 h。
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