论文部分内容阅读
背景与目的：卵巢癌(ovariancancer)是一种严重威胁妇女生命与健康的恶性肿瘤，病死率约占47％，位居妇科恶性肿瘤首位。由于卵巢癌早期症状隐匿，缺少有效检测手段，超过70％的患者发现时已为中晚期，手术及化疗为主的综合疗法往往疗效并不理想。所以如何有效的抑制肿瘤侵袭和转移，又能有效的杀伤肿瘤细胞是提高患者生存率的关键。光动力疗法(PDT)是一种能有效灭活肿瘤细胞，对瘤周组织损害小，并发症少，不与手术、放疗、化疗等肿瘤治疗方法相排斥的新方法。竹红菌素是从寄生在箭竹上的竹红菌中提取出的一种可用于抗菌、消炎、镇痛的苝醌类化合物。研究发现竹红菌素中的竹红乙素(HB)可作为光敏剂用于抗肿瘤的治疗。本文拟探讨HB光动力作用杀伤卵巢癌细胞HO-8910的效应和机制，以及对其运动能力的影响。材料与方法：HB光动力作用处理卵巢癌细胞HO-8910，利用MTT比色法进行细胞毒性测试；倒置显微镜观察比较不同组癌细胞的生长情况，Hoechst33258荧光染剂对不同组癌细胞核进行荧光染色观察，AnnexinV-FITC试剂检测各组癌细胞的凋亡率；透射电镜观察比较不同组癌细胞超微结构的改变；JC-1染剂进行检测并反映各组癌细胞线粒体膜电位的变化；各组癌细胞标记DCFH-DA荧光探针经FCM检测活性氧(ROS)的生成水平。并对处理后细胞的粘附、侵袭、迁移能力进行了观察。结果：选用浓度为2.5μM的竹红乙素(HB)与卵巢癌细胞HO-8910一同孵育5小时，用功率密度为60W/cm2的470nm光源进行光动力处理。结果显示PDT处理组杀伤卵巢癌细胞HO8910的效果显著，杀伤程度与光能量密度成依赖关系；PDT处理组的癌细胞在倒置显微镜下观察可见细胞固缩，折光度差，数量明显减少，其它各组的未见明显改变；光动力作用后6小时，PDT处理组经Hoechst33258荧光染剂细胞核染色可见核凝聚或碎裂，形成凋亡小体；利用AnnexinV-FITC试剂盒测得癌细胞的凋亡率较其它三组最高；透射电镜可见癌细胞微观结构较其它三组明显受到破坏，伴随凋亡小体形成。光动力作用后3小时，PDT处理组经JC-1荧光染色发现线粒体膜电位较其他各组明显降低；DCFH-DA检测后表明：ROS生成水平较其它三组明显升高，荧光强度曲线出现右移。PDT处理组相比其他各组在侵袭实验及迁移实验中穿过聚碳酯膜(PVPF膜)的癌细胞数目最少；在细胞粘附实验和细胞克隆实验中，粘附抑制率和细胞克隆形成率均明显低于其它各组。结论：HB光动力作用显著杀伤卵巢癌细胞HO-8910，癌细胞内生成大量的ROS导致线粒体的损伤，可能是最终细胞凋亡的重要原因；并且有效抑制癌细胞粘附、侵袭、迁移的能力。HB-PDT可能是一种潜在的卵巢癌治疗新疗法。