基因芯片方法检测六种动物源性人兽共患病病原

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H5亚型禽流感病毒、狂犬病病毒、2型猪链球菌、炭疽芽孢杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157是近年来发生较为普遍,与人们生活息息相关的六种动物源性人兽共病病原,当这些病原大规模流行时曾给人们正常的生活带来沉重打击。因此,采用快速、灵敏、高效的检测技术将病原早期定性对于上述人兽共患病的预防、控制具有重要意义。本研究针对目前检测上述六种动物源性人兽共患病病原方法的不足,采取具有快速、灵敏、特异及高通量的基因芯片技术来实现通过一次反应就可对上述六种病原的同步检测。首先,分别针对H5亚型禽流感病毒HA基因、狂犬病病毒NP基因、2型猪链球菌CPS基因、炭疽芽孢杆菌CapB基因、沙门氏菌invA基因、大肠杆菌O157的rfb E基因序列,运用生物学软件Primer Express2.0设计特异性的引物和探针。其次,将探针稀释成一定的浓度后按照一定的矩阵点样到基片上,经物理固定后制备杂交基因芯片。将标准毒(菌)株提取核酸后进行PCR扩增,将PCR产物与制备的基因芯片杂交优化反应温度,同时进行灵敏度和特异性实验。杂交结果显示,47℃为最佳杂交温度,特异性良好,灵敏度在10-5pg/μL-102pg/μL范围内。同时对TaqMan荧光定量PCR方法检测上述六种病原的灵敏度和特异性做了探讨。
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