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5-羟基-2-甲基苯并二氢吡喃酮(5-hydroxy-2-methylchrommanone,TL1-1)是螳螂(Tenodora aridifolia)肠道内内生真菌Daldinia eschscholzii代谢产物中分离到的一种酚类化合物。据文献报道,TL1-1对人类白血病细胞HL-60有显著的细胞毒性,对农业致病菌Micrabotryum violaceuw有显著的抑菌活性。然而,TL1-1的发酵工艺水平低,难以满足活性研究的需求量。且现有的TL1-1分离方法仍局限于TLC法、HPLC法,难以进行放大实验。本论文针对上述问题,在实验室其他同学500 L发酵工艺优化放大的基础上,针对TL1-1的不同分离制备工艺进行考察与比较。本论文建立了硅胶柱层析法分离制备TL1-1的工艺。采用硅胶柱层析对发酵液浸膏进行分离,上样浸膏与硅胶质量比为1:20;洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯体系,按照100:1、50:1、20:1、10:1、5:1的顺序进行梯度洗脱,每个梯度的洗脱体积为2 BV,体积流量为1 BV/h;当洗脱条件石油醚:乙酸乙酯=20:1时,富集获得TL1-1组分,纯度为59.75%,得率为68.82%。硅胶柱层析法因得率低、纯度低、难再生且有机溶剂消耗大等问题,难以符合高效的、经济节约的分离制备要求。在前述基础上,本论文又研究了大孔吸附树脂法分离制备TL1-1的工艺。通过吸附量与解吸率的比较,筛选出XAD-16树脂为最佳吸附树脂;通过静态动力学与热力学实验对工艺条件进行优化,发现XAD-16树脂对TL1-1的吸附符合准一级动力学模型、Weber-Morris模型以及Freundlich经验模型;通过动态吸附与解吸附实验,获得XAD-16树脂分离制备TL1-1的最佳工艺条件:上样量为11 BV,初始浓度为0.508 mg/mL,溶液pH值为4.0,上样流速为2 BV/h;洗脱剂为乙醇-水体系,浓度梯度依次为去离子水(4BV)、40%乙醇溶液(4BV)、95%乙醇溶液(4BV),体积流量为2BV/h。检测并收集95%乙醇洗脱液,在洗脱体积范围为1.5-3.5 BV时,富集获得TL1-1,纯度为84.64%,得率为75.06%。本论文还进行了 10倍放大实验,获得TL1-1的纯度为80.33%,得率为70.02%,与未经放大的实验结果相比几乎持平,说明XAD-16树脂在大规模分离制备TL1-1方面具有很好的应用前景。本论文对XAD-16树脂分离所得的TL1-1进行了结构确认。利用HPLC法进行初步定性分析,发现分离所得化合物与标准品的保留时间相一致。利用LC-MS法与1HNMR法分别对TL1-1进行分子量测定与结构确认,获得的TL1-1分子量(178)与结构氢谱数据均与文献报道结果一致,进一步确认化合物为TL1-1。此外,通过抑菌圈实验对分离制备所得TL1-1的抑菌活性进行了初步考察,发现TL1-1对烟草青枯病菌具有较好的抑制作用。综上所述,本论文主要对两种分离制备TL1-1的工艺方法进行了考察。与硅胶柱层析相比,XAD-16大孔吸附树脂在操作性、纯度、得率、可再生、安全性以及放大制备等方面皆具有显著的优势。这说明大孔吸附树脂法在分离制备天然产物方面具有非常好的应用前景与价值。