【摘 要】
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卵泡颗粒细胞是哺乳动物卵泡的重要组成部分之一,其命运与卵泡发育息息相关。在卵泡发育过程中,以颗粒细胞增殖或者凋亡为特征的卵泡发育或闭锁现象相伴而生。研究表明,双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）、雄激素受体（androgen receptor,AR）与抗苗勒管激素（Anti-Mullerian hormone,AMH）在早期有腔卵泡发育过程中高表达,而在有腔卵泡发育晚期过程中
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卵泡颗粒细胞是哺乳动物卵泡的重要组成部分之一,其命运与卵泡发育息息相关。在卵泡发育过程中,以颗粒细胞增殖或者凋亡为特征的卵泡发育或闭锁现象相伴而生。研究表明,双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）、雄激素受体（androgen receptor,AR）与抗苗勒管激素（Anti-Mullerian hormone,AMH）在早期有腔卵泡发育过程中高表达,而在有腔卵泡发育晚期过程中表达较低,但三者在卵泡发育尤其颗粒细胞增殖过程中的互作机制尚少见报道。本研究利用细胞免疫荧光技术、HE染色技术以及绘制生长曲线,对小鼠卵泡颗粒细胞的体外培养体系进行细胞纯度、形态以及生长活力的鉴定,采用细胞计数手段检测了不同浓度DHT处理48h后体外培养的小鼠卵泡颗粒细胞的数量变化情况;随后结合酶联免疫吸附技术与实时定量RT-q PCR技术探讨了添加不同浓度DHT处理48h后对小鼠卵泡颗粒细胞AMH蛋白与基因表达水平的影响;最后单独或者联合添加不同浓度DHT与AR调节剂（11-Ketodihydrotestosterone,AR激动剂;Flutamide,AR抑制剂）,探讨DHT调节小鼠颗粒细胞增殖与AMH蛋白表达的初步机制。结果显示,（1）体外培养的小鼠颗粒细胞呈经典的梭形或多边形,生长曲线呈经典的“S”型曲线,FSHR阳性细胞率较高;（2）在10-9～10-7mol/L DHT浓度范围内,随着DHT浓度升高颗粒细胞增殖活性逐渐增强;在10-7～10-5mol/L DHT浓度范围内,颗粒细胞增殖活性随着DHT浓度升高而逐渐减弱;10-7mol/L DHT处理组颗粒细胞增殖活性最强（P＜0.05）,10-5mol/L DHT处理组颗粒细胞增殖活性最弱（P＜0.05）;（3）在10-9～10-7 mol/L DHT浓度范围内,随着DHT浓度升高颗粒细胞AMH表达逐渐增强;在10-7～10-5mol/L DHT浓度范围内,颗粒细胞AMH表达随着DHT浓度升高而逐渐下降;10-7mol/L DHT处理组能够明显上调AMH的蛋白和基因表达,且与对照组相比,均差异显著（P＜0.05）,而10-5mol/L DHT处理组与之无显著差异（P＞0.05）。（4）与10-7mol/L DHT处理组相比,联合添加10-7mol/L DHT和10-6M Flutamide,可显著降低颗粒细胞数量（P＜0.05）;与10-5mol/L DHT处理组相比,联合添加10-5mol/L DHT和10-8 mol/L 11-Ketodihydrotestosterone,可明显升高颗粒细胞数量（P＜0.05）;（5）单独或者联合添加DHT与Flutamide以及11-Ketodihydrotestosterone处理48h后,10-7mol/L DHT处理对AMH蛋白表达的促进作用可以被Flutamide抵消（P＜0.05）,而10-5mol/L DHT处理组显著降低了AMH蛋白表达,此作用亦可被11-Ketodihydrotestosterone抵消（P＜0.05）。综上,体外培养的小鼠卵泡颗粒细胞纯度、形态以及生长活力良好。在体外培养过程中,10-7mol/L DHT通过激活AR途径,促进了颗粒细胞增殖与AMH表达;而10-7mol/L DHT对颗粒细胞增殖与AMH表达的下调作用可能与AR被抑制有关。本研究结果揭示DHT对小鼠卵泡颗粒细胞增殖具有双重作用,有助于深入理解小鼠卵泡发育机制。
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