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第一部分血管生成素在柔红霉素诱导大鼠肾病中的变化及意义目的探讨柔红霉素诱导大鼠肾病过程中,内源性血管生成素的异常变化及其病理作用。方法70只健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组30只,柔红霉素(Daunorubicin,DRB)组40只,DRB组大鼠,从尾静脉按15mg·kg-1注射柔红霉素,分别于注药后的第1、2、4、6、8、12周,随机取各组大鼠5只,收集24小时尿量,采血取肾,检测24h尿蛋白定量(24hUPQM)、血浆Angiopoietin1(Ang1)、Angiopoietin2(Ang2)和TNF-α,用PAS染色、免疫组化、原位杂交和透射电镜技术对鼠肾进行病理形态学分析。结果从第2周至第12周,DRB组与Control组在相同时间点上比较,24hUPQM显著增高。从第1周至第12周,DRB组与Control组的血浆Ang1水平无显著性差异。从第4周至第8周,在相同时间点上DRB组的血浆Ang2水平显著高于Control组。从第2周至第12周,DRB组的血浆TNF-α水平显著高于相同时间点的Control组。而且,随着病变的进展,肾小球Ang1mRNA和蛋白表达下调,Ang2mRNA、Ang2蛋白、TNF-α蛋白和Fn蛋白表达上调。DRB组的肾小球内Ang1mRNA和蛋白表达分别与24hUPQM呈负相关;血浆Ang2、肾小球Ang2mRNA和蛋白表达分别与24hUPQM呈正相关;血浆TNF-α浓度和肾小球局部的TNF-α蛋白表达分别与肾小球Ang2mRNA和蛋白表达呈正相关。肾小球内的Ang2蛋白表达与Fn蛋白表达、肾小球细胞外基质相对面积(MAECM)呈正相关。结论柔红霉素诱导大鼠肾病过程中,肾小球局部的Ang1表达减少,Ang2的表达上调。血浆的Ang2浓度升高和肾小球内的Ang2表达上调,可能共同介导了肾小球滤过膜通透性的增高,肾小球局部的Ang2可能还通过上调细胞外基质成分的表达促进肾小球硬化的形成。第二部分血管生成素在大鼠足细胞损害诱导肾小球硬化中的异常表达及意义一、足细胞损害后血管生成素的表达变化与肾小球硬化的关系目的探讨足细胞损害后内源性血管生成素的异常表达与进行性肾小球硬化的关系及其病理作用。方法使用单侧肾切除并2次注射柔红霉素的方法,诱导足细胞损害,100只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术(Sham)组30只、单侧肾切除(Uninephrectomy,UPHT)组30只和单侧肾切除+柔红霉素(DRB)组40只,DRB组大鼠,摘除左肾后的第7、14天,从尾静脉注射柔红霉素5mg.kg-1各1次。然后,分别于造模后的第1、2、4、6、8周,从各组大鼠中随机取出6只,收集24小时尿量,采血取肾,检测24h尿蛋白定量(24hUPQM)、血肌酐(Scr)和尿素氮(Bun),用PAS染色、免疫组化、原位杂交和透射电镜技术进行病理形态学分析。结果DRB组的24hUPQM、Bun、Scr显著高于相同时间点的Sham组和UPHT组;GSI随病变的进展逐步升高。免疫组化和原位杂交显示,DRB组的肾小球表达Ang1mRNA和Ang1蛋白下调,表达Ang2mRNA和Ang2蛋白上调。电镜显示,DRB组逐渐出现严重的足细胞损害。Sham组和UPHT组的肾小球没有病理改变。DRB组的Ang1mRNA表达与Ang2mRNA表达呈负相关;Ang1蛋白表达与Ang1mRNA表达呈正相关,与Ang2蛋白表达、CoIV蛋白表达、GSI、24hUPQM、Bun、Scr呈负相关; Ang2蛋白表达与Ang2mRNA表达、CoIV蛋白表达、GSI、24hUPQM、Bun、Scr之间呈正相关。结论足细胞损伤可能是导致肾小球内Ang1和Ang2表达失衡的主要原因,Ang1表达下调,失去对Ang2的抑制,使Ang2表达上调,并介导肾小球滤过膜通透性增高和肾小球硬化的形成。二、血管生成素的异常表达与肾小球毛细血管损失的关系及其意义目的探讨足细胞损伤后,肾小球内Ang1和Ang2的表达改变与肾小球毛细血管损失的关系及其意义。方法100只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术(Sham)组30只、单侧肾切除(Uninephrectomy,UPHT)组30只和单侧肾切除+柔红霉素(Daunorubicin,DRB)组40只。DRB组大鼠,摘除左肾后的第7、14天,从尾静脉注射柔红霉素5mg·kg -1各1次。Sham组和UPHT组亦同时以等量生理盐水尾静脉注射2次。完成上述处理后的第1周、2周、4周、6周、8周,随机取各组大鼠6只,采血和24h尿液检测肌酐清除率(Ccr),用PAS染色、免疫组化和原位杂交进行肾组织学分析,并用TUNEL法和透射电镜检测细胞凋亡。结果DRB组的Ccr显著低于相同时间点的Sham组和UPHT组;肾小球硬化指数(GSI)随病变的进展逐步升高。透射电镜下可见到凋亡的内皮细胞,肾小球凋亡指数(GAI)呈逐步增高的趋势,而肾小球毛细血管密度(GCD)呈逐步下降的趋势,DRB组的Ang1mRNA和蛋白表达量呈显著下降的趋势,Ang2mRNA和蛋白表达量呈逐渐增高的趋势。Fas、FasL和Caspase-3蛋白在肾小球内的表达也呈逐渐增高的趋势。相关分析显示,Ang1mRN和蛋白分别与Fas、FasL和Caspase-3蛋白表达呈负相关,与GCD、Ccr呈正相关,与GAI、GSI呈负相关。Ang2mRN和蛋白分别与Fas、FasL和Caspase-3蛋白表达呈正相关,与GCD、Ccr呈负相关,与GAI、GSI呈正相关。结论肾小球足细胞损伤后,局部Ang1和Ang2的表达平衡发生改变,与Fas/FasL及Caspase3凋亡途径的活化有关,并促进肾小球内皮细胞的凋亡,引起肾小球毛细血管的减损,进而导致肾小球硬化的进展。