论文部分内容阅读
目的：转录因子p53是一种很重要的抑癌基因,它在维持正常细胞基因组的稳定性及完整性方面发挥着巨大的作用,因此p53被称为“基因组的卫士”。近年来的研究发现,p53在代谢调控及细胞分化过程中起着重要的作用。研究表明p53可以调控多种细胞的正常分化如骨髓造血干细胞、胚胎干细胞、肌原性干细胞,但是关于p53在脂肪细胞分化过程中的作用研究甚少,本研究主要探讨p53对前体脂肪细胞分化的作用及其可能的作用机制。方法：构建慢病毒载体PLJM1-P53-GFP并转染3T3-L1细胞,筛选P53-3T3-L1过表达(p53-overexpression)细胞株、正常3T3-L1空白对照(3T3-L1)、空载对照(Vector)三组稳定细胞株；同时构建p53敲除的MEF细胞组(P53-/-MEF及对照MEF control细胞),建立体外诱导分化模型。通过western blot检测p53蛋白在正常脂肪细胞分化不同阶段的表达情况；通过油红染色、甘油三酯测定检测脂滴的形成情况；通过western blot及Q-RT-PCR检测分化过程中影响脂肪细胞分化的marker基因的表达情况；通过检测AKT信号通路,初步探讨p53影响脂肪细胞分化的机制。结果：Western blot检测发现随着脂肪细胞的分化,p53蛋白的表达在诱导分化的第0-4天逐渐升高,于分化第4天达到峰值,而在诱导分化的第8天及第10天逐渐下降(p<0.05),与对照组相比,p53-过表达组的3T3-L1细胞株其脂肪细胞的分化明显受到抑制,P53敲除组的P53-/-MEF细胞株其脂肪细胞的分化明显加强；油红染色及甘油三酯测定结果显示,p53-过表达组的3T3-L1细胞株在细胞分化过程中脂滴的形成明显减少,脂肪细胞分化的因子CEBPγ、CEBPα、AP2、LPL的表达明显下调(p<0.05),而P53敲除组的P53-/-MEF细胞株脂滴形成明显增加,CEBPγ、CEBPα、AP2、LPL的表达明显上调(p<0.05)。在MEF细胞模型中通过检测AKT信号通路显示：敲除p53后磷酸化AKT的水平降低(p<0.05)。结论：在脂肪细胞的分化过程中p53的表达先升高后降低,p53可以抑制脂肪细胞的分化,其抑制作用可能是通过AKT信号通路实现的。