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目的:采用不同浓度的亚硒酸钠(Sodium Selenite,Na2SeO3,SSE)作用于人胰腺癌细胞PANC-1,从细胞形态结构、抑制率及凋亡率来研究SSE对人胰腺癌细胞PANC-1的凋亡诱导作用,并通过检测不同浓度SSE作用PANC-1细胞后细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞色素C及Caspase3的变化,探讨SSE诱导PANC-1细胞凋亡与细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞色素C及Caspase的关系,以及在亚SSE诱导PANC-1细胞机制中的作用。 方法:通过显微镜观察SSE作用后PANC-1细胞的形态学改变;MTT比色法检测SSE对PANC-1细胞增殖的抑制作用;DNA ladder提取电泳观察细胞凋亡DNA的变化;用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,并检测细胞内活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位下降比率,酶联免疫吸附法(ELISA)法定量检测Caspase3凋亡相关蛋白,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内及线粒体内细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达,荧光定量PCR法检测基因cytC的表达 结果:SSE显著抑制人胰腺癌细胞PANC-1生长,并且具有浓度时间依赖性,并随着SSE浓度的增加和作用时间的延长,PANC-1细胞凋亡,坏死率逐渐增加;DNA ladder电泳呈明显的梯带状,并伴有拖尾,提示亦伴有大量坏死;MTT比色法显示随着SSE浓度增加和作用时间的延长,对PANC-1细胞的增殖抑制作用亦逐渐增强;Annexin V-FITC/PI检测发现PANC-1细胞的凋亡率随着SSE浓度增加而逐渐增多;荧光显微镜及流式细胞术观察细胞内活性氧(ROS)水平随着SSE浓度增加而逐渐增加;ELISA定量检测Caspase3含量与SSE水平呈正相关,随着SSE浓度的增加Western Blot及RT-PCR检测示,细胞内Cyt C含量无明显变化。 结论:(1)SSE具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,并具有浓度时间依赖性。(2)SSE具有诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡的作用,并具有浓度依赖性。(3)SSE诱导人胰腺癌细胞凋亡的机制可能与产生活性氧(ROS)、降低线粒体膜电位、激活Caspase系统及促使细胞色素C从线粒体的释放有关。