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研究背景胃癌是世界范围内排名第二位的癌症性死因，其发病率呈现上升趋势。由于绝大多数患者发现时已存在局部或远处转移，往往预后较差。胃癌的传统治疗包括手术治疗、放射治疗、化疗及支持治疗等，手术切除是目前最有效的治疗方法，但单纯手术治疗难以达到治疗目的，有些甚至无法进行手术治疗。辅助性化疗是治疗进展期胃癌的常用方法。5-FU是尿嘧啶的类似物，可阻断脱氧核糖尿苷酸被胸苷酸合成酶转化为胸苷酸，而干扰DNA的合成，是最早的应用于临床抗癌药物之一，也是胃癌化疗方案中的基础用药。近年来，有关胃癌对一线化疗药物耐药的报道愈来愈多，其机制尚未完全明了，如何改善胃癌细胞的化疗敏感性，对改善胃癌患者的预后、延长生存期具有重要意义。蛹虫草（Cordyceps militaris）是一种重要的传统中药材，具有抗肿瘤，抑制肿瘤转移，免疫调节，抗氧化，抑制炎症反应，杀虫，抗微生物，降血脂，延缓衰老，护肾及保护神经功能等功效。多肽，简称肽，参与细胞的生长、发育、生理功能以及分裂增殖各个环节。近年来研究发现，一些多肽具有促进机体淋巴细胞的增殖、增强巨噬细胞的吞噬功能，进而提高机体抵御外界病原体感染的能力，并具有抗肿瘤功能。有可能为胃癌的治疗带来新希望。研究方法第一部分：酶解法提取蛹虫草多肽，经超滤、冷冻干燥，制备成蛹虫草多肽冻干粉，Tricine-SDS-PAGE电泳验证蛹虫草多肽的存在。第二部分：进行胃癌细胞株SGC-7901的培养、传代及生长曲线测定，判断SGC-7901生长规律。采用MTT法测定SGC-7901对5-FU化疗敏感性的测定及不同浓度蛹虫草多肽（5mg/ml，10mg/ml和20mg/ml）对其的影响，并计算IC50值。选择合适浓度的蛹虫草多肽和5-FU浓度进行后续实验研究。第三部分：选择最佳浓度蛹虫草多肽进行其对5-FU化疗敏感性机制的研究。预设了以下4个实验分组：1）对照组：SGC-7901亲本株；2）实验组1:5-FU（1200μmol/L）处理组；3）实验组2：5-FU（1200μmol/L）+LY294002（20μmol/L）处理组；4）实验组3：5-FU（1200μmol/L）+蛹虫草多肽20mg/ml处理组；通过EdU检测肿瘤细胞增殖活性、WB法测定PI3K/Akt/mTOR通路、NF-κB/IκB的蛋白表达、流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。初步探讨蛹虫草多肽增强胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的机制。结果第一部分：通过胃蛋白酶、胰酶双酶酶解法经超滤、冷冻干燥，制备蛹虫草多肽冻干粉末，经Trincine-SDS-PAGE电泳初步鉴定其分子量主要介于4.1~66KDa。第二部分：1.蛹虫草含量为2.5mg/ml时对胃癌细胞株SGC-7901无明显抑制作用（P=0.621），浓度为5mg/ml，10mg/ml，20mg/ml的蛹虫草多肽溶液可以明显抑制胃癌细胞株SGC-7901的增殖活性（P<0.05）；不同浓度的蛹虫草多肽溶液对其抑制作用的组间比较结果显示，蛹虫草多肽对胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用具有剂量依赖性，在实验所采用的剂量范围内，蛹虫草多肽的浓度越高，对肿瘤细胞增殖的抑制作用越明显（P<0.05）。2.对照组SGC-7901对5-FU化疗的IC50为1206.3±53.2μmol/L；实验组中加入5mg/ml，10mg/ml，20mg/ml的蛹虫草多肽后，其IC50分别为1069.4±79.1μmol/L，987.8±40.5μmol/L，和943.1±49.5μmol/L；组间比较显示，各实验组IC50的值明显低于单用5-FU化疗组（P<0.05），蛹虫草多肽浓度越高，IC50下降越明显（P<0.05）。第三部分：1.EdU检测细胞增殖活性显示，各实验组肿瘤细胞的增殖活性明显低于对照组（P<0.05）；实验组2和实验组3的肿瘤细胞增殖活性明显低于实验组1（P<0.05）；实验组3肿瘤细胞增殖活性明显低于实验组2（P<0.05）。2.各实验组中p-PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达均明显低于对照组（P<0.05），实验组2和实验组3与实验组1相比上述蛋白的表达均明显降低（P<0.05），实验组2与实验组3相比无统计学差别（P=0.073，0.898和0.844）。3.各实验组中NF-κB p50和NF-κB p105的表达均明显低于对照组（P<0.05），实验组2和实验组3与实验组1相比NF-κB p50的表达均明显降低（P<0.05），实验组3与实验组2相比NF-κB p50的表达名下降低（P<0.05）。各实验组中IκB-β的表达均明显高于对照组（P<0.05），实验组2和实验组3与实验组1相比IκB-β的表达均明显增高（P<0.05），实验组3与实验组2相比IκB-β的表达明显增高增高（P<0.05）。4.各实验组与对照组相比胃癌细胞早期凋亡、晚期凋亡和总体凋亡的检出率明显增高（P<0.05）。实验组2和实验组3与实验组1相比早期凋亡、晚期凋亡和总体凋亡的检出率明显增高（P<0.05），实验组3与实验组2相比早期凋亡、晚期凋亡和总体凋亡的检出率明显增高（P<0.05）。结论1、通过胃蛋白酶、胰酶双酶酶解法净超滤、冷冻干燥，制备蛹虫草多肽冻干粉末，经Trincine-SDS-PAGE电泳初步鉴定其分子量主要介于4.1~66KDa。2、胃癌细胞株SGC-7901常规培养在48-72小时进入对数生长期，第5天进入平台期。在本实验采用的剂量范围内，蛹虫草多肽对胃癌细胞株SGC-7901的增殖具有抑制作用，其浓度越高，对胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用越明显(p<0.05)。3、蛹虫草多肽可增强胃癌细胞株SGC-7901的化疗敏感性并诱导其凋亡，其机制可能与抑制PI3K/Akt/m-TOR通路及调节NF-κB/IκB表达有关。