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选题依据:加味龟龄集酒是由山西广誉远国药有限公司生产的国药准字号药酒,其主要成分是在龟龄集药粉（28味药）的基础上增加了其中熟地黄和肉苁蓉的量,并添加了薄荷脑进行提味共同构成加味,最后配以酒基制成乙醇量为28%～32%的加味龟龄集酒。功能主治:补脑固肾,强壮机能,延年益寿。用于气虚血亏,健忘失眠,食欲不振,腰酸背痛,阴虚阳弱,阳痿早泄,宫冷腹痛,产后诸虚。加味龟龄集酒现有的质量标准仅有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、补骨脂素和异补骨脂素五种成分的薄层鉴别,没有含量测定方法,也没有指纹图谱方法。现有标准与目前同行业比较完善的质量控制标准存在较大的差距,亟待提高。因此本研究拟建立基于化学成分分析方法,结合网络药理法进行有效成分预测,进而建立反映整体质量控制的指纹图谱方法、增加薄层鉴别和含量测定,达到点面结合,全面提升加味龟龄集酒的质量标准。目的:为了寻找加味龟龄集酒中可以稳定存在的潜在活性成分,并建立加味龟龄集酒薄层色谱以及含量测定方法,建立适用于加味龟龄集酒的指纹图谱检测方法,以提升加味龟龄集酒的质量控制标准。方法:（1）运用UPLC-QTOF-MS高分辨质谱对加味龟龄集酒中的成分进行分析和鉴定,以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,流速为0.3ml·min-1;采用电喷雾离子源,在正负离子模式下采集数据;根据保留时间、分子量和碎片离子裂解规律与相关数据库和相关文献进行比对,推测其可能的化学结构,对未知化合物进行定性。（2）采用网络药理学技术对加味龟龄集酒进行成分与疾病共同靶标网络构建,并对网络中的节点和连接频次进行分析,可以预测出和靶点连接频次比较高的成分作为物质基础。对共同靶标进行基因富集分析,预测中药治疗疾病的关键通路。寻找出比较重要的活性成分,并且预测体内作用靶点与通路,阐明作用机制。（3）依据（1）和（2）的研究结果以及增加的熟地黄和肉苁蓉药味中成分的药效,在现有的基础上增加毛蕊花糖苷和松果菊苷的TLC,以甲醇-醋酸-水（2:1:7）为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯（365nm）下检视,建立薄层鉴别方法。依据药典和文献中的相关操作方法,分别以乙腈-0.5%磷酸水为流动相等度洗脱,新建加味龟龄集酒中毛蕊花糖苷和松果菊苷含量测定高效液相色谱法;以甲醇-0.5%磷酸水为流动相梯度洗脱,新建地黄苷D和5-羟甲基糠醛的含量测定高效液相色谱法。（4）采用高效液相色谱以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,对19批次的加味龟龄集酒进行检测,然后将液相的结果导入中药指纹图谱相似度评价系统软件中进行数据的处理,建立加味龟龄集酒指纹图谱方法。结果:（1）通过UPLC-Q-TOF-MS高分辨质谱对加味龟龄集酒化学成分进行定性分析,最终鉴定出了36个化合物,其中包括苯乙醇苷类化合物、环烯醚萜类化合物、人参皂苷类化合物、有机酸类化合物、香豆素类化合物、核苷类化合物、多糖类化合物、黄酮类化合物和其它类化合物。其中苯乙醇苷类中的毛蕊花糖苷和松果菊苷两种成分的信号响应比较高,建议对其进行定量分析。（2）通过网络药理学得到潜在有效成分的靶基因相关关系,结果表明加味龟龄集酒中的8-马钱子酸、地黄苷D、人参皂苷Ro、异毛蕊花糖苷、补骨脂素、肉苁蓉苷F、人参皂苷Rh1、淫羊藿苷、甘草苷、松果菊苷、人参皂苷F1和毛蕊花糖苷等成分可能是其发挥药效作用的潜在化合物,可作为加味龟龄集酒潜在活性成分的参考。通路富集分析发现,加味龟龄集酒可能是通过参与调控关键细胞反应以及细胞凋亡的通路来起到延缓衰老的作用;通过参与炎症反应和环境应激通路的调节来发挥抗炎作用的;通过参与调节低氧应激反应通路来改善气虚血亏的症状;另外,加味龟龄集酒还参与调节多条癌症通路,可能有潜在预防相关癌变的功能。根据预测结果分析,建议对含量较高且具有药理活性的毛蕊花糖苷和松果菊苷两种成分进行含量测定,另外8-马钱子酸、地黄苷D、补骨脂素和肉苁蓉苷F的药理活性显著,建议构建指纹图谱进行整体质量控制。（3）依据（1）和（2）的研究结果以及处方中成分的药效,建立了毛蕊花糖苷和松果菊苷的TLC法,并且建立了四种成分的HPLC法。薄层鉴别中供试品色谱在对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性无干扰,成功建立了毛蕊花糖苷、松果菊苷薄层鉴别方法;HPLC含量测定中备样方法及检测过程均高效简便,方法学考察符合药典规定,成功新建了毛蕊花糖苷和松果菊苷以及地黄苷D和5-羟甲基糠醛的含量测定方法。（4）采用0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈流动相进行梯度洗脱,在203nm下检测55min,得到的加味龟龄集酒指纹图谱稳定可靠,方法学考察符合药典规定,可以作为对其进行整体质量控制的方法。指纹图谱中共标定了27个共有峰,且通过与对照品对比以及通过UPLC-MS对加味龟龄集酒化学成分进行定性分析,最终指认出了15个共有峰,其中包括苯乙醇苷类化合物、环烯醚萜类化合物、有机酸类化合物和香豆素类化合物,能够反映出网络药理学预测的6种潜在活性成分。结论:本研究从反映药效的物质基础方面对加味龟龄集酒进行质量标准提升,首先通过液质联用技术鉴定出了36个化合物,并结合网络药理学预测出12种潜在活性成分,根据预测的活性成分建立了加味龟龄集酒的薄层鉴别、含量测定和指纹图谱方法,其中对毛蕊花糖苷和松果菊苷进行了薄层鉴别以及含量测定,对地黄苷D和5-羟甲基糠醛进行了含量测定,对8-马钱子酸、地黄苷D、补骨脂素、肉苁蓉苷F、松果菊苷、和毛蕊花糖苷等成分进行了指纹图谱整体控制。由点及面,点面结合,建立了能够反映加味龟龄集酒药效成分稳定性的质量标准,为现代中药质量控制提供了科学的方法依据。