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卵巢上皮性癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,死亡率居妇科恶性肿瘤之首。卵巢深居盆腔,卵巢上皮性癌起病比较隐匿。在初期阶段,卵巢癌症状不典型,因此早期诊断很难。大约70%的病人在确诊时已是FIGO分期的III期或IV期,这样5年生存率就很低。在全世界范围内,约有200000名妇女被诊断患有这种恶性肿瘤,每年有12500疾病相关死亡病例。这种疾病的高死亡率可以通过在疾病进展期的晚期诊断解释,通常伴有广泛的腹膜腔转移。尽管理想的肿瘤细胞减灭术和铂类联合化疗可以提高恶性肿瘤患者的预后,但是5年生存率仍然只有40%。组蛋白乙酰化转移酶（Histone acetyltransferases,HATs）和组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylases,HDACs）调控组蛋白乙酰化。HDACs的病理活性和表达可以引起如癌症、免疫紊乱和肌营养不良等严重疾病。去乙酰化酶在癌症中的表达往往是失调的,HDACs的表达干扰细胞周期调控和分化。HDAC2常常在肿瘤中过度表达,而且HDAC2表达水平是临床一个独立的预后指标。此外,在治疗过程中监测HDAC2表达可作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）疗效标志。肿瘤抑制因子p53是HDAC2的目标蛋白。大量的p53四聚体的目标基因调控生长停滞、衰老和凋亡去抑制细胞转录。此外,p53影响代谢过程和活性氧的产生。无论是由于TP53（人类p53编码的基因）缺失和突变,或者是控制p53蛋白表达水平和活性的信号通路的改变,都导致了大多数肿瘤中存在异常的p53信号通路。翻译后修饰包括磷酸化,乙酰化,经典泛素化,和小泛素化,影响p53并且调控它在体内的功能。p53与其他转录因子和调节因子的相互作用也调控p53的表达和活性。最近研究表示,p53的功能和hdac2之间存在紧密联系。乙酰化是正常p53功能不可缺少的。一些研究表明,k320乙酰化是与p53信号通路相关的,而这个位点是hdac2的作用靶点。最近表明,在结肠癌细胞中hdac2蛋白去乙酰化p53的赖氨酸残基k320。一个小泛素化的修饰物作用于hdac2,接着hdac2与p53之间的相互作用可以使原本乙酰化的p53k320去乙酰化,减弱p53与dna的结合能力,影响下游靶基因的转录调控。k320位于p53与dna的连接区域/四聚化结构域的c-末端区域。由此发现p53蛋白的c-末端与hdac2相互作用比n-末端部分更强烈。通过减少位于dna结合域和p53四聚体结构域的p53k320乙酰化,产生无活性的p53四聚体,使得p53dna结合能力显著降低,从而强烈影响p53靶基因的表达,促进细胞的异常增殖或活化,最终促进肿瘤的发生。但hdac2与乙酰化p53k320的相互作用是否对卵巢癌的发生发展存在作用仍不清楚。目的本研究在细胞水平对hdac2、p53和乙酰化p53k320进行研究,探讨hdac2的表达以及hdac2与p53、乙酰化p53k320的相互作用对卵巢癌细胞株的影响。材料和方法1.研究对象:卵巢癌细胞株skov3、ovcar3两株细胞来自郑州大学第三附属医院科研中心保存,两株细胞培养均采用1640培养基（含10%灭活太牛血清、100u/ml青霉素、100mg/l链霉素）在37℃、5%co2培养箱中培养。将细胞分为skov3空白对照组、skov3+空shrna组、skov3+hdac2shrna1组、skov3+hdac2shrna2组、skov3+hdac2shrna3组、ovcar3空白对照组、ovcar3+空shrna组ovcar3+hdac2shrna组、ovcar3+hdac2shrna2组、ovcar3+hdac2shrna3组。2.研究方法:采用质粒转染的方法,转染shrna进入实验组细胞,沉默hdac2,使用realtime-pcr和westernblot检测10组细胞中hdac2蛋白和mrna的表达,使用westernblot对p53、乙酰化p53k320蛋白的表达进行检测,使用cck8检测细胞活力。3.统计学方法:采用统计软件SPSS17.0分析数据。应用单因素方差分析比较实验组中HDAC2 mRNA的表达水平,组间两两比较采用LSD法。应用单因素方差分析比较实验组中HDAC2、p53、乙酰化p53k320蛋白表达水平,组间两两比较采用LSD法。检验水准采用α=0.05,组间两两比较时检验水准采用α′=α/比较次数=0.0167。结果1.转染48h后,与空白对照组、阴性对照组比较,HDAC2shRNA1组和HDAC2shRNA2 HDAC2表达量降低,并且差异有显著性（P<0.05）。2.转染48h后,实验组与空白对照组,阴性对照组比较,p53表达升高,差异有显著性（P<0.05）,同时,HDAC2shRNA组乙酰化p53k320蛋白表达降低,与空白对照组,阴性对照组比较差异有显著性（P<0.05）,阴性对照组与空白对照组之间的差异无显著性（P>0.05）。转染48h后,实验组与空白对照组,阴性对照组比较,卵巢癌细胞活力下降,差异有显著性（P<0.05）。结论1、shRNA靶向沉默HDAC2基因,下调HDAC2的表达导致乙酰化p53k320及p53蛋白的表达上调;2、下调HDAC2的表达可能通过上调乙酰化p53k320蛋白及p53蛋白,抑制了skov3、ovcar3的细胞活力。