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目的：在动脉粥样硬化(AS)的研究中，斑块的胞外基质(ECM)成分的变化与疾病的进展有重要联系，而基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)的平衡对维持ECM的动态平衡有着十分重要的作用。建立合适的AS动物模型是研究其发病机制及探讨治疗措施的重要前提条件。本实验从AS的主要的三种发病机制出发，建立和比较了三种建立大鼠AS模型的方法；同时以该模型为基础，探讨了MMP-9/TIMP-1的动态平衡与AS的关系；也研究了血管组织及血浆血管紧张素H(AngⅡ)水平与AS的关系；探讨了AngⅡ 1型受体拮抗剂氯沙坦是否具有抗AS作用，以及机制如何。 实验方法：1、将实验大鼠分为5组：正常对照组、高脂组(高脂饲料喂养)、高脂+维生素D负荷组、高脂+维生素D负荷+球囊损伤组、氯沙坦组(在高脂+维生素D负荷+球囊损伤组基础上加氯沙坦干预)，喂养3个月后，测血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、CA水平，并通过对比各组胸主动脉的内中膜厚度变化、HE染色、CD68及α平滑肌肌动蛋白(α-actin)的免疫组化，比较了三种大鼠AS模型。2、应用免疫组化、Western-blot、Zymography、RT—PCR的方法，在已建立的大鼠AS病变的整体模型中观察了MMP-9和TIMP-1的基因、蛋白及酶活性的表达模式的变化，也观察了氯沙坦有无抗AS作用及MMP-9和TIMP-1的变化。3、运用放射免疫分析法测定了各实验组的AngⅡ水平(血管组织及血浆)，以胸主动脉内膜厚度作为AS严重程度指标，探讨了两者之间的关系。4、在体外，分离培养大鼠血管平滑肌细胞，运用Western blot、Zymography以及RT-PCR的方法，观察了不同浓度的AngⅡ、氯沙坦及两者共同作用对大鼠VSMC产生MMP-9第二军医大学博士毕业论文中文摘要和’TIMP．1基因、蛋白及酶活性的影响。 主要结果：1、高脂组、高脂+维生素D负荷组、高脂+维生素D负荷+球囊损伤组TC、tG和L．DI。一C均较正常对照组明显升高(P<0．01)；高脂+维生素D负荷组、高脂+维生素D负荷+球囊损伤组血钙浓度均较对照组和高脂组明显升高(P<0．01)；病理学观察发现高脂组和正常对照组基本无差别，高脂+维生素D负荷组主动脉壁内膜增厚、平滑肌细胞增生明显、中膜萎缩，形成较典型的纤维增生性动脉硬化斑块，高脂+维生素D负荷+球囊损伤组内膜进一步增厚，中膜明显受压萎缩，突出的斑块内含有大量的泡沫细胞，平滑肌细胞减少，见钙化灶，深部为坏死物质，内含胞外脂质，主动脉壁形成典型的较成熟动脉粥样硬化斑块。胸主动脉cDj8免疫组织化学检测阳性程度随As进展逐渐增强，Q．actin的免疫组化示高脂+维生素D负荷组和高脂+维生素D负荷+球囊损伤组中层受压萎缩，前者内膜SMC增生，后者内膜SMC减少。2、免疫组化、Westernblot、Zymo~hyr以及RT-PCR．法显示，随着AS进展，MMP．9及T’IMP．1基因、蛋白及酶活性水平均逐渐增强，MMP．9／’FIMP．1值也逐渐增强(除高脂+维生素D负荷组较其它组低)。氯沙坦组与阳性对照组(高脂+维生素D负荷+球囊损伤组)比较，内膜增厚程度、中膜萎缩程度明显减轻，MMP．9明显减低，’FIMP．1增加，MMP．9／TIMP．1值明显减低。3、随着AS进展，胸主动脉的AnglI水平逐渐升高，血浆AnglI水平无变化，胸主动脉的AnglI与内膜厚度具有正相关性(P<0．01)。4、Westem blot、Zymogr~hv以及RT-PCR．法显示，AnglI呈浓度依赖性促进大鼠vSMC产生MMP．9蛋白、基因和酶活性的增加，对TIMP．1无影响，使MMP．9／’FIMP．1值增高；氯沙坦呈浓度依赖性抑制大鼠VSMC的MMP．9蛋白、基因和活性的产生，促进TIMP．1的增加，使MMP．9H’IMP．1值减低；氯沙坦和AnglI共同作用，大鼠VSMC产生MMP．9、’FIMP．1的基因、蛋白、酶活性的变化与单独应用氯沙坦一致，且与氯沙坦呈浓度依赖性。 结论：1、大鼠可作为研究AS的良好动物模型，通过合适的干预，模拟出AS斑块。单纯给予大鼠高脂饲料(含胆固醇、胆酸钠、硫氧嘧啶、猪油)不易形成．AS病变：给予大鼠高脂饲料加维生素D负荷仅仅导致以VSMC增生为第二军医大学博士毕业论文 中文摘要 l主的纤维增生性动脉硬化；给予大鼠含高脂饲料十维生素D负荷十内膜球囊损伤术可形成较成熟 AS病变斑块。2、随着 AS进展，斑块 MMP司及 TIMP八蛋白、基因和酶活性水平逐渐增强，反映＊S的＊＊M降解及合成代谢均明显增强：＊S各期的MMP一厅IMP上值变化，说明纤维增生性动脉硬化斑块ECM合成强于降解，AS早期及较成熟动脉硬化期斑块ECM降解强于合成，且后者强于前者；氯沙坦可通过减低MMP习，升高TIMPl起抗动脉粥样硬化作用。3、随着AS进展，胸主动脉的Angll水平逐渐升高，胸主动脉的Angll与内膜厚度具有正相关性，说明Angll可能是AS的致病因素之一。4、比较Angll、氯沙坦及两者共同作用 VSMC产生规P令及 TmPl的变化，说明氯沙坦通过抑制 Angll的作用而使MMP司厅IMP上下降可能是氯沙坦的抗动脉粥样硬化作用机制之一。