论文部分内容阅读
上皮间质转化(EMT)是指上皮细胞失去细胞之间的紧密连接，细胞骨架发生重排，从而转变为间质细胞的过程。作为一种程序性的、可逆的生物学过程，EMT出现在胚胎发育及器官形成、组织修复和再生及肿瘤细胞侵袭、迁移的过程中。EMT的发生是一个动态过程，与转录因子、miRNA、细胞微环境等相互作用，形成复杂的调控网络。
E-cadherin蛋白是由基因CDH1编码，其主要作用是介导细胞与细胞之间的黏附作用，是上皮型细胞的主要标志物之一。研究表明E-cadherin是抑癌基因，其启动子区域的突变、甲基化等都影响E-cadherin的表达，进而影响肿瘤的EMT过程。其中，TGF-β在调节细胞活动中起着重要作用，是诱导肿瘤细胞发生EMT的经典诱导因子。因此，本论文主要以E-cadherin为标志物，利用诱导因子TGF-β1验证EMT示踪模型。
本研究主要构建了以E-cadherin启动子的荧光示踪体系，并证明了该示踪体系的可行性，并利用该体系证实多肽M1-138能够抑制EMT。首先，验证了A549细胞和MCF-7细胞能有效响应经典的EMT诱导因子TGF-β1的诱导，选择这两种细胞作为模型细胞；然后，构建E-cadherin启动子的慢病毒载体，并与包装质粒pVSVG、?8.91共转染HEK293T细胞，进行慢病毒的包装，形成具有感染能力的慢病毒颗粒，进一步感染A549和MCF-7细胞，构建稳定细胞株。随后。利用TGF-β1诱导两种细胞株48h后，发现绿色荧光强度下降，同时E-cadherin和GFP在mRNA和蛋白水平的表达下降，因此，说明E-cadherin启动子的示踪体系是有效可行的。最后，两种细胞株中加入纯化的多肽M1-138，发现两种细胞的绿色荧光强度增加，同时E-cadherin和GFP在mRNA和蛋白水平表达上升，说明M1-138能促进E-cadherin的表达，有效抑制细胞的EMT进程。
综上所述，利用E-cadherin启动子示踪EMT，该过程简单、快捷，可以有效筛选出EMT相关的小分子药物、多肽等，为研究肿瘤的EMT过程研究奠定了基础。
E-cadherin蛋白是由基因CDH1编码，其主要作用是介导细胞与细胞之间的黏附作用，是上皮型细胞的主要标志物之一。研究表明E-cadherin是抑癌基因，其启动子区域的突变、甲基化等都影响E-cadherin的表达，进而影响肿瘤的EMT过程。其中，TGF-β在调节细胞活动中起着重要作用，是诱导肿瘤细胞发生EMT的经典诱导因子。因此，本论文主要以E-cadherin为标志物，利用诱导因子TGF-β1验证EMT示踪模型。
本研究主要构建了以E-cadherin启动子的荧光示踪体系，并证明了该示踪体系的可行性，并利用该体系证实多肽M1-138能够抑制EMT。首先，验证了A549细胞和MCF-7细胞能有效响应经典的EMT诱导因子TGF-β1的诱导，选择这两种细胞作为模型细胞；然后，构建E-cadherin启动子的慢病毒载体，并与包装质粒pVSVG、?8.91共转染HEK293T细胞，进行慢病毒的包装，形成具有感染能力的慢病毒颗粒，进一步感染A549和MCF-7细胞，构建稳定细胞株。随后。利用TGF-β1诱导两种细胞株48h后，发现绿色荧光强度下降，同时E-cadherin和GFP在mRNA和蛋白水平的表达下降，因此，说明E-cadherin启动子的示踪体系是有效可行的。最后，两种细胞株中加入纯化的多肽M1-138，发现两种细胞的绿色荧光强度增加，同时E-cadherin和GFP在mRNA和蛋白水平表达上升，说明M1-138能促进E-cadherin的表达，有效抑制细胞的EMT进程。
综上所述，利用E-cadherin启动子示踪EMT，该过程简单、快捷，可以有效筛选出EMT相关的小分子药物、多肽等，为研究肿瘤的EMT过程研究奠定了基础。