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研究背景：微囊藻毒素LR (MCLR, microcystin-LR)是微囊藻毒素中存在最为普遍且毒性作用最明显的一种。MCLR是蛋白磷酸酶2A(PP2A, protein phoshatase2A)的强抑制剂,对PP2A的抑制作用可能是造成其致毒作用机制错综复杂的原因之一。神经酰胺是细胞对外界环境刺激产生的一类主要的第二信使,PP2A/B55a亚基和PP2A/B56a亚基可被神经酰胺激活。本实验室的前期研究发现,MCLR能够刺激人胚肾细胞HEK293和小鼠肾脏中神经酰胺水平的升高,升高的神经酰胺上调了HEK293细胞中PP2A/B55a以及PP2A/B56a这两种调节亚基的蛋白水平。本研究拟探讨MCLR染毒入肝细胞HL7702后神经酰胺在PP2A亚基改变及其底物蛋白磷酸化水平改变中的作用。研究方法：以人肝细胞系HL7702为模型,对细胞用MCLR染毒及用神经酰胺合成酶抑制剂Desipramine (DESI)处理,应用免疫荧光技术检测神经酰胺水平,用免疫印迹技术检测PP2A各亚基蛋白水平及其底物MAPK、c-myc、Raf-1、Akt、 bcl-2、Ezrin、VASP和Hsp27的总蛋白及磷酸化蛋白水平,用Hoechst33342染核方法检测细胞凋亡。研究结果：1MCLR对HL7702细胞处理24小时后,神经酰胺水平明显升高。用10μM DESI与MCLR共处理HL7702细胞后,神经酰胺水平的上升得到了抑制。2. MCLR与DESI共处理细胞后,MCLR引起的PP2A/B55a和PP2A/B56a蛋白水平上调效应消除。但是DESI共处理不影响MCLR引起的PP2A/A和PP2A/C亚基蛋白水平的变化。3MCLR影响了PP2A底物MAPK c-myc、Raf-l、Akt、bcl-2、Ezrin、VASP、Hsp27的磷酸化水平,其中c-myc、Akt、bcl-2、Hsp27在加入DESI后其磷酸化水平的升高被抑制。4.虽然bcl-2的磷酸化水平上升,但未检测出MCLR对HL7702细胞的细胞凋亡产生可见影响,DESI的加入也没有改变这个结果。研究结论：HL7702细胞在受到MCLR刺激后,主要经神经酰胺合成途径使神经酰胺水平升高；升高的神经酰胺上调了PP2A/B55a以及PP2A/B56a这两种调节亚基的蛋白水平；与此同时,也影响了MCLR引起的PP2A底物c-myc、Akt、 bcl-2、Hsp27蛋白磷酸化水平的升高。表明在MCLR的作用过程中,神经酰胺可能起到了一定的调节作用,但具体的机制还有待深入研究。