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研究背景与目的:乙型肝炎病毒感染的临床表型复杂多样,其形成机制尚未阐明。除了病毒因素外,宿主遗传易感性是一个重要的方面。宿主感染HBV后,MHC-Ⅱ类分子的表达水平直接影响宿主对HBV的免疫应答。CⅡTA是调控细胞表达MHC-Ⅱ类分子及其水平的限速因子,通过调控细胞是否表达MHC-Ⅱ类分子及水平来决定宿主的免疫功能状态,从而影响感染性疾病、自身免疫性疾病、移植排斥及肿瘤的发生、发展及转归。在HBV感染的遗传易感性研究中,疾病的关联研究最常用。国外研究发现CⅡTA基因存在SNPs,并与自身免疫性疾病的易感性相关。我们前期研究发现中国人CⅡTA基因也存在SNPs,其中启动子Ⅳ区有4个。我们选择启动子Ⅳ区等位基因频率较高的2个SNP位点G-944C、T-1350C在HBV感染人群中进行基因分型,探讨CⅡTA启动子Ⅳ区基因多态性是否与HBV感染不同临床表型的形成有关,并对CⅡTA基因启动子Ⅳ区不同单倍型进行初步功能研究。研究对象与方法:在1420例不同临床表型的HBV感染人群和125无HBV感染的正常健康献血员中,采用四引物扩增受阻突变体系PCR技术对CⅡTA启动子Ⅳ区2个SNP位点G-944C和T-1350C进行基因分型,分析每个位点及每种单倍型和基因型在HBV感染不同临床表型人群中的分布频率。然后选取经四引物扩增受阻突变体系PCR分型技术确定的CC/CC、CG/CG、TC/TC和TG/TG基因型患者各1例,分别提取其外周全血细胞DNA作模板,制备CⅡTA基因另外4种单倍型DNA的部分片段,并构建包含4种单倍型启动子Ⅳ区DNA的萤光素酶报告基因表达载体。将2种萤光素酶报告基因空载体和4种单倍型的表达载体分别与pRL-TK内参质粒共转染HepG2细胞,检测插入目的片段前后萤光素酶表达量的变化来反映不同单倍型DNA片段的功能。主要研究结果:一、CⅡTA基因启动子Ⅳ多态性与HBV感染慢性化的关系相对于自限性HBV感染人群,在HBV感染慢性化人群中T-1350C位点的T等位基因和G-944C位点的G等位基因频率较低,而T-1350C位点的C等位基因和G-944C位点的C等位基因在HBV感染慢性化人群中频率显著升高(X2=18.1,18.0;P=6.3×10-5,6.3×10-5).四种单倍型中,慢性HBV持续感染人群中CC单倍型频率较急性自限性HBV感染者高,TG单倍型频率较低(X2=17.3,P=7.9×10-5).非条件logistic回归分析除去年龄和性别影响后发现,慢性HBV持续感染和自限性HBV感染人群之间4组基因型频率分布相差非常显著（OR 0.507;95%CI,0.401-0.642;P=6.9×10-8）,而且这种差异主要见于CC/CC与TG/TG基因型之间(OR 0.503;95%CI,0.394-0.641;P=1.7×10-8)。与携带TG/TG基因型者相比,携带CC/CC基因型者感染HBV后更容易慢性化。健康献血员的单倍型及基因型频率介于慢性HBV感染人群和自限性HBV感染人群之间。二、CⅡTA基因启动子Ⅳ多态性与慢性HBV感染者疾病表型间的关系4种单倍型在慢性无症状HBV感染、慢性乙型肝炎及HBV感染相关性肝硬化人群中分布频率彼此间存在显著差异（P均小于0.001）;与慢性无症状HBV感染者相比（CC:46.5%;TG:32.9%;CG:15.9%）,肝硬化人群中CC单倍型频率（35.3%）较低,CG（29.3%）与TG（34.0%）单倍型频率较高,其中CG单倍型频率升高更显著;与慢性无症状HBV感染者相比,慢性乙型肝炎人群中CC单倍型频率（37.2%）较低,TG（42.2%）与CG（18.9%）单倍型频率较高,其中TG单倍型频率升高更显著;与慢性乙型肝炎者（CC:37.2%;TG:42.2%;CG:18.9%）相比,肝硬化人群中CC（35.3%）与TG（34.0%）单倍型频率较低,而CG（29.3%）单倍型频率显著升高（CG比CC:x2=8.274,df=1,P=0.004;CG比TG:x2=15.027,df=1,P=0.000）;两组人群间CC与TG单倍型频率相差不显著（x2=1.231,df=1,P=0.267）。慢性无症状HBV感染、慢乙肝、肝硬化三组人群彼此间各组基因型的频率也均存在非常显著差异（P=0.000）;其中含CG单倍型的基因型（CG/CG,CG/CC和CG/TG）在肝硬化人群中频率最高（53.5%）。三、CⅡTA启动子Ⅳ不同单倍型DNA片段的功能研究包含CⅡTA启动子Ⅳ两SNP位点的片段（-1382～-913nt）插入pGL3-basic载体后转染HepG2的细胞萤光素酶表达量与pGL3-Basic转染HepG2后的细胞萤光素酶表达量之间无差异,提示CⅡTA-1350T/C和-944G/C位点所在的DNA片段（-1382～-913nt）无启动子活性。但pGL3-Promoter-CⅡTA-CC、pGL3-Promoter-CⅡTA-CG、pGL3-Promoter-CⅡTA-TC和pGL3-Promoter-CⅡTA-TG转染HepG2后的细胞萤光素酶表达量,均显著低于pGL3-Promoter转染HepG2后的细胞萤光素酶表达量,提示CⅡTA-1350T/C和-944G/C位点所在的DNA片段（-1382～-913nt）具有衰减子的功能。且四种单倍型间有显著差异,TG的萤光素酶活性（0.558±0.023）显著高于CG（0.464±0.016）、TC（0.463±0.015）、CC（0.302±0.016）单倍型。CG和TC单倍型高于CC单倍型（P=0.000）,但CG和TC单倍型间活性无显著差异（P=0.892）。结论:1.CⅡTA启动子Ⅳ-1350C/T和-944G/C两个SNP位点所在的DNA片断（-1382～-913nt）无启动子活性,但具有衰减子的功能,-1350C/T和-944G/C位点多态性可影响CⅡTA启动子Ⅳ的活性。2.CⅡTA启动子Ⅳ的基因多态性与HBV感染的不同转归密切相关,其中活性最低的CC单倍型及CC/CC基因型与HBV感染的慢性化有关,活性最高的TG单倍型及TG/TG基因型与病毒的自限性清除有关,活性介于两者之间的CG单倍型及含CG单倍型的基因型（CG/CG,CG/CC和CG/TG）则与肝硬化的形成相关。