论文部分内容阅读
研究目的: 观察信号转导子和转录激活子3(Signal transducer and activator of transcription3，STAT3)抑制剂Stattic(Y705)对人肝癌细胞的生长、迁移侵袭和放射敏感性的影响并初步研究其作用机制，同时探讨抑制STAT3对肝癌放射治疗的作用，以期发现新的放射治疗增敏的靶点。 研究方法: 1.采用RT-PCR检测三种肝癌细胞株中STAT3 mRNA表达水平，并采用Western Blot检测肝癌细胞中STAT3蛋白及p-STAT3蛋白的表达水平。 2.CCK8法检测检测Stattic对肝癌细胞株SMMC-7721细胞、HepG2细胞、Bel-7402细胞生长的影响。 3.CCK8法检测Stattic联合X线照射对肝癌细胞株SMMC-7721细胞、HepG2细胞、Bel-7402细胞生长的影响。 4.采用克隆形成实验观察Stattic对肝癌细胞株SMMC-7721细胞、HepG2细胞、Bel-7402细胞放射敏感性的影响。 5.采用Western blot检测Stattic联合X线照射对肝癌细胞株SMMC-7721细胞、Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的影响 6.采用伤口愈合实验观察Stattic联合X线照射对肝癌细胞株Bel-7402细胞迁移能力的影响。 7.采用transwell小室侵袭实验观察Stattic对肝癌细胞株Bel-7402细胞侵袭能力的影响。 8.采用Western blot检测Stattic联合X线照射对肝癌细胞株Bel-7402细胞侵袭相关蛋白的表达变化。 研究结果: 1.在三种肝癌细胞中，STAT3在SMMC-7721和Bel-7402中，表达量均较高，而pSTAT3蛋白在Bel-7402中表达量最高。 2.Stattic对肝癌细胞有明显的增殖抑制作用。在SMMC-7721中，48h时Stattic的50％抑制生长浓度(IC50)是5.13μmol/L;在HepG2中，48h时Stattic的IC50是2.94μmol/L;在Bel-7402中，48h时Stattic的IC50是2.54μmol/L。 3.Stattic与X射线可以协同抑制肝癌细胞的生长。在SMMC-7721中，8Gy X射线照射组细胞生存率为62％±5％，1.5μmol/L Stattic组细胞生存率为79％±2％，联合组细胞生存率为42％±2％，且stattic和X线照射两者之间存在协同(F=50.764，P=0.000)。在HepG2中，8Gy X射线照射组细胞存活率为54％±2％，1.5μmol/L Stattic组细胞生存率为86％±4％，联合组细胞生存率为39％±4％，两者之间存在协同(F=34.912，P=0.000)。在Bel-7402中，8Gy X射线照射组细胞存活率为59％±1％，1.0μmol/L Stattic组细胞生存率为91％±2％，联合组细胞生存率为48％±2％，两者之间存在协同(F=63.295 P=0.000)。 4.Stattic对肝癌细胞具有明显的放射增敏作用。在SMMC-7721中,放射增敏比SERD0为1.18，SERDq为2.37，SERSF2为1.42。在HepG2中，放射增敏比SERD口为1.56，SERDq为1.82，SERSF2为1.63。在Bel-7402中，放射增敏SERD0为1.65，SERDq为1.08，SERSF2为1.22。 5.X线照射和Stattic均可以下调bcl-2蛋白水平，上调Bax、 Cleaved Caspase-3蛋白水平，但与单纯照射组相比，联合组凋亡蛋白改变更为明显。 6.通过Stattic抑制STAT3的磷酸化表达后，Bel-7402细胞的迁移能力和侵袭能力受到抑制，MMP-2，MMP-9下调;X线照射后STAT3的磷酸化表达增加，Bel-7402细胞的迁移能力和侵袭能力增加，MMP-2，MMP-9上调;联合组Bel-7402细胞的迁移能力和侵袭能力同样受到抑制，MMP-2，MMP-9下调。 研究结论: 1.在SMMC-7721、HepG2、Bel-7402三种肝癌细胞中，Bel-7402表达STAT3和pSTAT3最高。 2.Stattic可以有效抑制肝癌细胞的生长。 3.Stattic和放射治疗可以协同抑制肝癌细胞的生长。 4.Stattic可以增加肝癌细胞的放射敏感性。 5.Stattic可以上调凋亡蛋白的表达;放射治疗可以上调凋亡蛋白的表达;Stattic增加肝癌细胞放射敏感性的机制与抑制p-STAT3从而促进凋亡蛋白表达相关。 6.Stattic可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭;放射治疗可以增加肝癌细胞的迁移和侵袭能力，其机制与放疗后STAT磷酸化表达增加上调MMP表达相关;Stattic可以抑制放疗后的肝癌细胞的迁移和侵袭能力。