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目的:采用基因编辑技术(CRISPR/Cas9)构建CACYBP/SIP基因敲除的人乳腺癌MCF-7细胞单克隆株,探讨CACYBP/SIP基因缺失对MCF-7细胞表型的影响,以期明确CACYBP/SIP在乳腺癌发生发展中的可能作用及机制。方法:设计靶向CACYBP/SIP的sgRNA,构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro真核表达载体,电转化MCF-7细胞,进行嘌呤霉素抗性筛选,然后用Cruiser?错配酶法检测sgRNA的活性,最后通过测序筛选CACYBP/SIP基因敲除稳定的MCF-7细胞株;验证采用Real time PCR检测CACYBP/SIP基因mRNA的表达,Western blot检测CACYBP/SIP蛋白的表达;表型试验采用Brdu和MTT试剂盒检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,统计学分析采用两个独立样本的T检验。结果:通过crispr/cas9基因敲除技术,筛选得到了乳腺癌MCF-7细胞系的CACYBP/SIP基因缺陷单克隆株。验证结果显示CACYBP/SIP mRNA表达量零,CACYBP/SIP蛋白无表达,提示CACYBP/SIP基因缺陷的MCF-7细胞株构建成功。进一步对CACYBP/SIP基因缺陷的MCF-7细胞株进行表型检测,MTT结果显示敲除株细胞增殖能力显著降低,Brdu检测结果显示敲除株细胞增殖显著降低(p<0.05);平板克隆实验结果显示敲除株形成克隆个数显著降低(p<0.05);细胞凋亡结果显示敲除株凋亡百分比显著上升(p<0.05)。结论:本研究成功构建了CACYBP/SIP基因敲除载体,并获得乳腺癌MCF-7细胞系的CACYBP/SIP基因缺陷单克隆株,其表型检测结果显示细胞增殖能力和克隆形成能力下降,同时,细胞凋亡率升高,提示CACYBP/SIP基因可能在乳腺癌中发挥着积极“促癌”的作用。