控制采后炭疽病高效拮抗菌的选育及作用机理研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hnbc2008
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枯草芽孢杆菌能产生大量抗菌物质,是具有较好拮抗作用的菌株,本实验采用离子注入枯草芽孢杆菌获得诱变菌株,以苹果采后炭疽病菌为指示菌进行了筛选,并将诱变菌株用于苹果采后炭疽病的防治效果,还探讨了其遗传稳定性、营养要求和发酵条件、抗菌机制。实验结果如下:1.离子注入枯草芽孢杆菌高效拮抗菌的诱变与筛选利用低能氮离子对枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)进行注入诱变,获得诱变菌株。通过平板初筛,筛选出6株对苹果炭疽病菌有较高抑菌作用的菌株,经苹果果实活体测定从中筛选对苹果炭疽病有较好作用的菌株。接种方式试验,表明方式二的效果好于方式一,对苹果炭疽病表现出较好的保护作用。其中室温下的防治效果较好菌株为BS80-6,14d时的防效为33.28%;低温条件下BS100-1、BS100.6、BS80-6、BS120-8的效果较好,30d时的防效分别为98.36%、95.36%、95.52%、93.52%;变温下各菌株BS80-1、BS100-1、BS120-8的效果最好,30d时的防效分别为84.59%、75.15%、72.40%。诱变菌株对分生孢子盘抑制作用最好的菌株分别为较BS-CK好的菌株有:BS80-6、BS100-6(室温);BS100-1、BS100-6、BS120-8、BS80-6(低温),变温时各菌株对病菌分生孢子盘的作用低于BS-CK。各诱变菌株对潜伏侵染控制效果中,经各诱变菌株处理的苹果室温下放置20d后,BS80-6、BS120-8、BS80-1对潜伏侵染表现了一定的控病作用。借抗菌三种处理液的抑菌和防病作用中发酵液的作用最强。2.枯草芽孢杆菌诱变菌株遗传稳定性的测定具有遗传稳定性是诱变菌株应用价值的前提,本实验将诱变菌株转接7代,用其测定其对炭疽病的防治效果,结果表明该菌株在防病效果上具有遗传稳定性。3.枯草芽孢杆菌诱变菌株的生长和发酵条件研究BS80—6(B.subiffs-80—6)是经离子注入枯草芽孢杆菌诱变获得的对苹果炭疽病具有高效拮抗作用的菌株,经发酵培养对其生长所需的营养进行研究的结果表明:BS80-6生长最佳的碳源为麦芽糖,最佳氮源是蛋白胨,最佳矿质元素为氯化钾,最佳维生素为核黄素。并通过二次通用旋转组合设计方法对BS80-6菌株培养基的最佳组合进行了研究,建立了具有较好预测性能的培养基反应模型,并用试验数据验证了该模型的可靠性,利用该模型对培养基最优组合的营养元素对菌体生长量反应规律及交互作用进行了探讨,并对影响该菌株生长的因子进行了比较,结果发现:BS80-6与BS-CK两菌株对生长因子的要求不同,五个因子对表示BS80-6菌株生长影响的顺序分别为:核黄素>蛋白胨>pH>KCI>麦芽糖。五个因子对BS-CK菌菌株生长影响大小顺序为:pH>KCI>核黄素>蛋白胨>麦芽糖。两因子交互作用对S80-6菌株生长影响的大小顺序为:X1X3>X2X5>X1X2>X2X4>X4X5>X2X3>X1X4>X1X5>X3X4>X3X5,其中仅b13、b(45)、b23达到显著水平。两因子互作对BS-CK菌株生长影响的大小顺序为:X2X3>X2X5>X1X4>X2X4>X4X5>X2X3>X1X4>X1X5>X3X4>X3X5,其中b13、b12、b25达到显著水平。为提高BS80-6菌株的防治效果,对菌株生长及其抗菌物质产生的适宜培养条件进行了初步研究,其中适宜生长的pH值为7.0-8.0,适宜生长的温度条件为25-28℃,通气量为250mL三角瓶中装液量为50mL的条件下有利于菌株生长及抗菌物质的产生。并用对两菌株生长曲线的分析表明,该菌株在发酵培养72-80h左右生长量达到最大值。4枯草芽孢杆菌诱变菌株对苹果炭疽病菌抗菌机制研究经离子注入诱变枯草芽孢杆菌获得高效菌株BS80-6,对苹果炭疽菌的防治效果明显,其发酵液、滤液、高压灭菌液对苹果炭疽菌孢子萌发的抑制作用中发酵液的作用最强,同时考察其发酵液对苹果炭疽病菌的平板抗生作用、液体共培养条件下拮抗菌对苹果炭疽菌菌丝破坏作用的结果表明,其抗菌机制表现为抑制孢子萌发、使菌丝变形、顶端膨大、原生质凝聚。同时,通过对寄主要防御酶过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化的分析可知,该菌株能够诱导寄主产生抗病性。
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