乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属嗜肝性DNA病毒,HBV感染与肝炎、肝硬化等肝脏疾病的发生发展关系密切,并可能最终引起肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。目前HBV的致病机制尚未完全被阐明,故深入研究探讨HBV感染而引发的各种疾病的发病机制对于预防和治疗乙型肝炎病毒感染相关疾病的意义深刻而重大。HBV基因组为3.2kb、部分双链、环状的DNA,包含P、C、S和X四个开放读码框,分别编码聚合酶(Polymerase)、核心抗原(HBcAg)、表面抗原(HBs Ag)和X蛋白(HBx)。其中,HBx蛋白为HBV致病的重要因子之一,由154个氨基酸组成,分子量16.5kD,且该蛋白不稳定,半衰期约为30-40min。核受体相互作用蛋白(NRIP)能与核受体家族成员如雄激素受体、雌激素受体、孕激素受体和糖皮质激素受体等结合,并可在相应配体依赖的途经下增强受体介导的一系列转录活动。NRIP拥有WD40重复序列并能够可通过其与DDB1–CUL4–ROC1 E3连接酶的组分DDB1结合,参与泛素-蛋白酶体系统,募集底物。本实验室前期已通过酵母双杂交系统筛选出一系列能与HBx蛋白相互作用的蛋白,其中之一为NRIP,但目前NRIP对HBx的功能的影响及机制尚不清楚,本研究在酵母双杂交研究的基础上,验证了NRIP能与HBx在真核细胞内发生相互作用,并进一步探究NRIP对HBx的蛋白稳定性及其功能影响。本文第一部分旨在验证HBx与NRIP的相互作用,基于之前酵母双杂交初步筛选的结果,我们分别构建了HBx和NRIP的表达载体pHBx-Flag和pNRIP-Myc,将两者共同转染至肝癌细胞Huh7细胞内,用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)的方法进一步验证HBx与NRIP在真核细胞内能发生相互作用。本文第二部分旨在研究NRIP对HBx的稳定性的影响。首先检测NRIP对HBx的蛋白表达量的影响。将HBx和NRIP共同转染至Huh7细胞内,随着胞内NRIP转染量的增加,HBx的蛋白水平随之增高。而在Huh7细胞中过表达HBx蛋白未对NRIP的蛋白水平产生影响。随后探讨NRIP影响HBx蛋白水平的机制。运用RT-PCR过表达NRIP对HBx的mRNA水平无明显影响,我们推测NRIP对HBx蛋白水平的调控是通过影响HBx的降解途径来实现的,经蛋白酶体抑制剂MG132处理后,NRIP使HBx的蛋白水平进一步增加,提示NRIP蛋白对HBx蛋白的影响是通过抑制其泛素-蛋白酶体途径的降解。