同源异型盒基因MSX1在人乳腺癌中的表达、甲基化状态及其抑制乳腺癌细胞生长、转移机制的研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jinhait2009
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目的:  检测人乳腺癌细胞株和乳腺组织中的MSX1表达情况;MSX1基因启动子在人乳腺癌中的甲基化状态及其临床意义;MSX1抑制人乳腺癌细胞增殖和侵袭的机制。  方法:  (1)通过实时定量荧光PCR(Real-time fluorescence quantitative-PCR, Real-time PCR)、逆转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)、甲基化特异性 PCR(Methylation specific PCR, MSP)、A+T实验(5-aza-2’-deoxycytidine,Aza+TrichostatinA,TSA))四种方法,分析乳腺癌细胞株、乳腺癌组织和正常乳腺组织中MSX1基因的表达情况及其甲基化状态;(2)利用在线数据库GOBO分析MSX1在不同分子类型的乳腺癌组织中的表达情况。(3)通过克隆形成实验、CCK8实验、细胞划痕实验、Transwell等体外实验评估MSX1对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测MSX1对active-b-catenin表达的影响,以及对P53蛋白和凋亡相关蛋白表达的影响。  结果:  (1)实验结果显示在乳腺癌细胞株中MSX1的表达水平降低。MSX1基因启动子在77.8%(7/9)的乳腺癌细胞株和44.4%(16/36)的乳腺癌组织中检测到甲基化。(2)通过采用A+T的实验方法处理MSX1表达下调和沉默的乳腺癌细胞株(MB231、MB468、MCF-7),这三株肿瘤细胞中MSX1基因启动子去甲基化,同时伴随表达水平的下降,结果表明MSX1基因启动子甲基化是导致其表达下调的原因之一。(3)克隆形成实验、CCK8实验、细胞划痕实验、Transwell等体外实验结果显示,外源性表达MSX1能够抑制乳腺癌细胞在体外的生长;MSX1能够下调β-catenin的表达,从而调控Wnt/β-catenin信号通路发挥抑制乳腺癌增殖和侵袭能力的作用;MSX1通过发挥G1期阻滞作用而抑制乳腺癌细胞的生长;MSX1能够上调乳腺癌细胞中P53蛋白的表达,可能为其发挥抑癌作用的机制之一。
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