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目的:青叶胆(Swertia mileensis)为龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)植物青叶胆的干燥全草,具有清肝利胆、清热利湿的功效,常用于治疗肝脏疾病。文献报道青叶胆所含的活性成分环烯醚萜苷类化合物和氧杂蒽酮类化合物等具有改善非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用,然而查阅文献发现青叶胆改善NAFLD的研究甚少。因此本论文针对青叶胆对高脂饮食诱导的NAFLD小鼠脂质代谢的调节,尤其是对甘油三酯代谢的调节作用进行研究,明确青叶胆的药效物质和作用机制,为青叶胆的临床应用提供理论和实验依据。方法:(1)采集道地产区云南省弥勒地区的青叶胆干燥全草,70%乙醇提取得到青叶胆提取物(Swertia mileensis extracts,SME)。基于文献报道和实验室前期检测条件,采取HPLC方法检测SME中龙胆苦苷(Gentiopicroside,GPS)和去甲基雏菊叶龙胆酮(Demethylbellidifolin,DMB)的含量。(2)通过高脂饮食诱导C57BL/6小鼠构建NAFLD模型。按照SME 100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg的剂量灌胃给药3个月,给药结束后检测小鼠血清以及肝脏中的生化指标,通过对肝脏组织进行苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,H&E)和油红O染色确定青叶胆总提物的药效,通过实时荧光定量反转录PCR(Quantitative Real-time reverse transcription-PCR,q-RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测肝脏中脂代谢相关基因的转录水平与蛋白的表达,初步确定青叶胆改善NAFLD的潜在作用机制。(3)通过油酸钠诱导Hep G2细胞构建脂蓄积体外模型,给予细胞SME以及GPS单体作用24 h,检测甘油三酯(Triglyceride,TG)和总胆固醇(Total cholesterol,TC)以评价青叶胆和GPS体外降脂作用,进一步通过WB检测GPS对脂代谢相关基因的转录以及蛋白的表达水平,明确青叶胆对NAFLD的作用机制。结果:(1)通过HPLC方法检测得出云南省弥勒地区SME中GPS含量为4.28 mg/g,DMB的含量为9.79 mg/g。(2)对小鼠血清以及肝脏的生化指标检测后发现,相较于正常组,模型组小鼠肝脏中TG和TC显著性升高,血清中TC、谷丙转氨酶(Alanine amino transferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate amino transferase,AST)和低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)显著升高,血清中的TG有所升高但没有统计学差异,血清中的高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)没有显著变化;相较于模型组,给药组中SME能显著降低小鼠肝脏中TG和TC的含量,降低血清TG、ALT、AST和LDL-C含量,升高血清中HDL-C含量。H&E及油红O肝脏染色结果显示SME能显著降低NAFLD模型小鼠肝脏的脂质蓄积,改善肝细胞肥大,缓解肝损伤。初步表明SME能够改善脂蓄积和肝损伤,保护肝脏。对青叶胆作用机制进一步研究,q-RT-PCR结果显示SME能显著上调小鼠肝组织中肉碱棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyl transferase 1,CPT-1)、激素敏感脂肪酶(Hormone sensitive lipase,HSL)及脂肪甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceride lipase,ATGL)基因的转录水平,下调固醇调节元件结合蛋白1c(Sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)基因的转录水平。WB结果显示SME能显著上调沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT-1)、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(Adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶(Phosphorylated acetyl-Co A carboxylase,p-ACC)/ACC、CPT-1、HSL、p-HSL及ATGL蛋白的表达,下调SREBP-1c、FAS和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl-Co A desaturase 1,SCD-1)蛋白的表达。(3)通过检测给药后的Hep G2细胞脂蓄积模型中的TG和TC发现,与正常组细胞相比,模型组细胞中TG和TC含量显著上升;与模型组细胞相比,SME以及GPS能显著降低油酸钠诱导的Hep G2细胞中TG和TC的含量;油红O染色结果显示SME以及GPS能显著改善油酸钠诱导的Hep G2细胞中的脂滴蓄积。WB结果显示GPS能显著上调SIRT-1、AMPK、p-AMPK、p-ACC/ACC、p-HSL/HSL以及CPT-1蛋白的表达,下调SREBP-1c、FAS和SCD-1蛋白的表达。结论:SME能显著调节NAFLD小鼠模型的脂质代谢,改善NAFLD,保护肝脏。其作用机制可能是通过激活AMPK/SIRT-1/SREBP-1c、AMPK/ACC/CPT-1以及AMPK/ATGL通路相关的基因转录和蛋白表达,减少脂肪合成,促进脂肪氧化和水解,改善NAFLD。本课题为青叶胆应用于NAFLD新药研发以及临床合理用药提供了科学依据。