青岛沿海四株大型海藻代谢产物及其生物活性筛选的研究

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海洋生物具有产生丰富多样的次生代谢产物的能力,其结构新颖、生物活性独特,引起了国内外科学家的高度重视。植物病原菌对农业生产的严重威胁,化学农药的残留问题严重、开发费用过高,以及海洋细菌对海洋设备的污损问题,都亟待解决。因此找寻环境友好型的新型农药和天然防污材料的模板化合物是当今刻不容缓的研究课题。海黍子(Sagassum kjellmanianum)、鼠尾藻(Sargassum thunbergii)、酸藻(Desmarestia viridis)和扇形拟伊藻(Ahnfehiopsis flabelliformi)是青岛沿海四种常见海藻,本论文通过对这四种海藻的化学和生物筛选来展开研究,以期获得环境友好型农药和防污材料。干燥并粉碎四株大型海藻样品,分别运用有机溶剂提取、萃取、梯度洗脱、薄板层析等手法,对所选的四株大型海藻进行了初步的提取分离,然后运用高效液相色谱仪(HPLC)对其粗提物的各梯度洗脱组分进行分析;并以5株农业病原菌和4株海洋细菌作为供试菌株对其不同极性组分的代谢产物进行初步的抑菌活性筛选,发现海黍子为优势藻种,次级代谢产物丰富、抑菌活性较好。并以海黍子为研究对象,进行次级代谢产物的分离纯化。主要结论如下:1.四种海藻的筛选:将在青岛沿海采集到的海黍子、鼠尾藻、酸藻和扇形拟伊藻四种大型海藻的干燥藻体粉碎,分别使用乙醇浸提、超声提取后,滤液蒸干得浸膏,获得的乙酸乙酯相进行柱层析梯度洗脱。对每种藻体得到的各洗脱组分进行HPLC分析和初步的抑菌活性筛选。筛选结果表明:海黍子化合物丰富度高于其它三种海藻。抑菌活性实验中,在抑制农业病原菌活性方面,四株海藻的各梯度洗脱组分对五株植物病原真菌(阳性对照为两性霉素B)均能产生一定的抑制效果,海黍子表现出了较好的抑制活性,其中Fr2对小麦赤霉菌(XC)以及番茄早疫菌(FZ)的抑制效果最强,抑菌圈分别为11.4mm和11.3mm(阳性对照分别为14.0mm和15.5mm);在抑制海洋细菌(阳性对照为氯霉素)活性方面,四种海藻也均表现出了一定的抑制活性,其中也以海黍子抑菌活性最明显,Fr4对金黄色葡萄球菌(SA)的抑菌圈直径达17.5mm(阳性对照为22.5mm),Fr2和Fr4对苏云金芽孢杆菌(BT)的抑菌圈直径分别达19.5mm和20.7mm(阳性对照为24.0mm)。另外,四株海藻中以海黍子生物量最大,采集较方便。综合以上考虑,选择海黍子作为后续研究对象。2.海黍子次级代谢产物和初步的抑菌活性研究:干燥并粉碎的海黍子,经过溶剂浸取、萃取,制成浸膏后,以常规的硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH-20柱层析、制备薄层层析(pTLC)以及重结晶等分离手段,分离纯化得到单体化合物。综合利用各种现代波谱技术以及与标准品和文献数据比对的方法,进行化合物及结构鉴定。在分离纯化过程中,共获得5个单体化合物,均为首次从该藻种中获得。运用1H-NMR、13C-NMR、DEPT等现代波谱学技术,鉴定出其中3个化合物的结构。对海黍子17个梯度洗脱组分进行了抑菌活性测定,得到的结论与初次筛选实验中基本保持一致。对5个单体化合物进行了抑菌活性测定,发现其对供试真菌均没有抑制活性;在海洋细菌方面,化合物Ⅲ对金黄色葡萄球菌(SA)、枯草芽孢杆菌(BS)和苏云金芽孢杆菌(BT)有微弱的抑制活性;化合物Ⅳ对枯草芽孢杆菌(BS)有微弱的抑制活性;化合物Ⅴ对金黄色葡萄球菌(SA)有较强的抑制活性,抑菌圈为14.5mm,对大肠埃希氏杆菌(EC)有微弱的抑制活性,对枯草芽孢杆菌(BS)有中等程度的抑菌活性,抑菌圈为10.8mm。
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