一株白及内生菌和一株冬虫夏草内生菌的化学成分研究

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中药内生菌的部分次级代谢产物具有结构新颖、活性强等特点,某些内生菌还能产生与宿主中药类似或相同的化学成分,对中药内生菌化学成分的研究已成为发现新的天然产物及寻找具有新药开发价值活性成分的一个重要途径。本论文分别对从白及中分离得到的一株内生菌和从冬虫夏草中分离得到的一株内生菌化学成分进行了研究,从上述二株内生菌中共分离鉴定出28个化合物,其中化合物22为新的天然产物。论文第一部分内容为对从中药白及新鲜药材中分离得到的一株内生菌进行系统性的化学成分研究。实验从中药白及新鲜药材中分离纯化得到内生菌,对分离得到的内生菌经ITS基因测序鉴定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)。鉴定后的菌株先进行小批量的液体发酵以得到种子菌液,然后将种子菌液接种至糙米固体培养基中采用固体发酵的形式进行发酵以得到其次级代谢产物,对得到的次级代谢产物在分析型高效液相色谱以及薄层色谱等的指引下,利用硅胶柱色谱、反相C8柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等进行样品的粗分,然后采用半制备型高效液相色谱进行进一步细分以得到单体化合物,运用NMR、ESI-MS等波谱学方法对分离得到的化合物进行鉴定,最后共分离鉴定出22个化合物,分别是:α-亚麻酸甲酯(1)、亚油酸甲酯(2)、aloesol(3)、4-羟基苯甲醛(4)、ganodermasides D(5)、dankasterone A(6)、calvasterol B(7)、cyclo-(L-phenylalanyl-L-proline)(8)、penioxalicin(9)、5α-麦角甾-7,22-二烯-3β,5,6β-三醇(10)、cis-4-hydroxyscytalone(11)、3,4-dihydroxyphenylacetic acid methyl ester(12)、原儿茶酸(13)、cyclo-(4-S-hydroxy-R-proline-R-isoleucine)(14)、cyclo-L-(4-hydroxyprolinyl)-L-leucine(15)、2,5-dimethyl-7-hydroxychromone(16)、4-羟基苯甲酸乙酯(17)、cladospolide E(18)、环(L)-脯氨酸-(D)-亮氨酸(19)、cyclo(L-6-Hyp-L-Phe)(20)、Paecilomycine A(21)、(Z)-5-((1R,4R,4a S,8a S)-4,6-dihydroxy-5,8a-dimethyl-2-methylene-7-oxo-1,2,3,4,4a,7,8,8a-o ctahydronaphthalen-1-yl)-3-methylpent-2-enoic acid(22)。其中化合物1,4-10,12-15,17-22共计18个化学物为首次从Penicillium oxalicum中分离得到,化合物22为新的天然产物。对得到的化合物利用SPR技术初步测定其与PD-1、PD-L1、TNFR1三种肿瘤免疫蛋白的结合作用,结果显示化合物dankasterone A(6)、化合物cis-4-hydroxyscytalone(11)与PD-1,PD-L1,TNRF1三种肿瘤免疫蛋白均有结合。第二部分内容为对从冬虫夏草中分离得到的一株内生菌进行系统性的化学成分研究。实验从新鲜冬虫夏草中分离纯化得到内生菌,对筛选得到的目标菌株进行ITS基因测序,最终鉴定为毛壳菌(Mucor luteus)。对鉴定后的菌株进行大规模扩大发酵以得到次级代谢产物,用乙酸乙酯萃取发酵液得到样品浸膏,以分析型高效液相色谱和薄层色谱为指导,通过硅胶柱色谱对样品进行粗分,然后采用半制备型高效液相色谱进一步分离纯化得到化合物,运用NMR、ESI-MS等波谱学方法进行鉴定,共分离鉴定得到6个化合物,分别是:20-O-methyl-24-epi-cyclocitrinol(1),(15S)-15-hydroxy-24-epi-cyclocitrinol(2),(16R)-16-hydroxy-24-epi-cyclocitrinol(3),coniochaetones B(4),4-羟基苯甲酸(5),苯甲酸(6),其中化合物1-5为首次从M.luteus中分离得到。对得到的化合物利用SPR技术初步测定其与PD-1、PD-L1、TNFR1三种肿瘤免疫蛋白的结合作用,结果显示化合物20-O-methyl-24-epi-cyclocitrinol(1)、化合物(15S)-15-hydroxy-24-epi-cyclocitrinol(2)、化合物coniochaetones B(4)与PD-1,PD-L1,TNRF1三种肿瘤免疫蛋白均有结合。
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