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前言前列腺癌目前已成为西方国家男性最常见的恶性肿瘤和主要死亡原因之一。我国随着人口老龄化地加剧以及医疗检测水平的提高,发病率逐年上升。美国NCBI收录了大量来自不同的正常及肿瘤组织的基因表达序列分析(SAGE)数据库,通过CGAP提供的分析软件筛选并研究前列腺癌与正常组织的差异表达基因,发现新的前列腺癌相关基因,然后用生物学方法证实,为分析前列腺癌新的诊断方法和治疗途径奠定重要的理论及实验基础。我们在前期实验中利用NCBI提供的SAGE数据库及分析软件获得了前列腺癌与正常组织的差异表达基因,确定功能完全未知的BRP44基因为进一步研究的兴趣基因。通过Northern Blot实验证实:BRP44在前列腺癌组织的表达丰度高于良性前列腺瘤组织,BRP44在LNCaP(雄激素依赖性前列腺癌细胞)中高表达而在PC-3(雄激素非依赖性前列腺癌细胞)中不表达。通过生物信息学方法初步推断BRP44可能是一个在转录或者翻译水平控制肿瘤细胞线粒体中某些基因表达的调节因子。RNA干扰实验证实BRP44对LNCaP细胞的生长增殖起着负向调节作用,而BRP44对恶性度更高,早期转移及侵袭力更强的PC-3细胞的生物学性状的影响是本课题研究的主要任务。实验方法培养LNCaP细胞及PC-3细胞,提取LNCaP细胞总RNA,通过RT-PCR合成BRP44基因片段并予以鉴定,与质粒真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A构建成质粒真核表达重组体pcDNA3.1/myc-His A- BRP4,通过脂质体转染法转染PC-3细胞,经过培养、筛选、挑取细胞克隆,并培养获得稳定高效表达BRP44的PC-3细胞。并测定细胞的生长曲线、细胞周期、侵袭力以及致瘤率的变化而判断高表达BRP44的PC3细胞的生物学性状的改变。实验结果本实验对BRP44基因目的片段的PCR扩增产生的特异性条带约500 bp,与预计片段大小相同。重组体送上海Sangon公司进行测序,序列分析序列与已经公布的BRP44基因的核苷酸序列完全一致,插入片段位置及方向性正确,表明我们构建的pcDNA3.1/myc-His A- BRP44真核表达载体构建成功。转染pcDNA3.1/myc-His A-BRP44的PC-3细胞经过G418的反复筛选,最后获得高表达BRP44的PC3细胞。并通过RT-PCR检测确认BRP44在PC-3细胞亚克隆的高表达,与预计片段大小相同。按目的基因转染入肿瘤细胞后其生物学特性的测定,我们发现高表达BRP44的PC3细胞细胞的增殖力、侵袭力以及致瘤率均明显增强。结论本课题通过构建稳定高表达的基因BRP44的PC-3细胞,并按外源性目的基因转染入肿瘤细胞后其生物学特性进行测定,我们发现高表达BRP44的PC3细胞的增殖力、侵袭力以及致瘤率均明显增强。初步判断BRP44可能是前列腺癌的上调表达基因。为确定BRP44作为我们今后研究前列腺癌的兴趣基因提供了理论依据。