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目的乙型病毒性肝炎是我国的一种常见慢性传染病,严重威胁我国居民的生命和健康。目前尚缺乏理想的治疗药物,探索新的药物仍然是当务之急。地菍在民间被应用于肝炎方面的治疗,但该草药有无真正的抗病毒及护肝作用尚缺乏实验依据。本研究通过鸭乙肝动物模型,评价该草药的水提物和醇提物的抗鸭乙肝病毒作用和护肝疗效,为开发新的治疗乙肝药物提供科学依据。方法1.共购买1日龄广西麻鸭201只,其中24只进行短期重复剂量毒性试验,每组8只,分为地菍水提物组(3.64g/kg·d)、地菍醇提物组(3.64g/kg·d)、正常对照组(生理盐水),28天经口重复给药后评价地菍水提物和醇提物短期内使用对麻鸭的可能毒性性质和靶器官。2.剩余177只1日龄广西麻鸭适应性饲养24h后,其中155只经腹腔注射鸭乙肝病毒血清0.15ml,第7天采集颈静脉血,通过PCR方法检测血清鸭乙肝病毒DNA(DHBV DNA);22只不作任何处理,从中筛选血清DHBV DNA阴性麻鸭。3.随机选取血清DHBV DNA阳性麻鸭80只,分为模型组(生理盐水)、拉米夫定组(200mg/kg·d)、地菍水提物高(3.64g/kg·d)、中(1.82g/kg·d)、低(0.91g/kg·d)剂量组和地菍醇提物高(3.64g/kg·d)、中(1.82g/kg·d)、低(0.91g/kg·d)剂量组,每组10只;随机选取血清DHBV DNA阴性麻鸭10只设为空白组(生理盐水),共9个实验组。于注射病毒血清后第14天起每日早上灌胃给药1次,连续28天。分别于给药前(T0)、给药第7天(T7)、给药第14天(T14)、给药第21天(T21)、给药第28天(T28)、停药后第5天(P5)采集颈静脉血;停药后第6天处死麻鸭、取肝组织样本。4.通过SYBR Green I荧光染料法,建立实时荧光定量PCR检测血清DHBV DNA载量方法,评价其特异性、敏感性和重复性,并对标准曲线进行分析;酶联免疫试验(ELISA)检测血清DHBsAg/DHBeAg水平,全自动生化分析仪检测血清ALT/AST活性,最后对肝脏组织进行病理学检查。5.运用Excel2007和SPSS20.0软件进行数据整理和统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.药物对DHBsAg和DHBeAg水平的影响:拉米夫定组、地菍水提物/醇提物高、中、低剂量组与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2.药物对DHBV DNA载量的影响:拉米夫定组T7、T14、T21、T28的血清DHBV DNA载量与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.01),停药后(P5)出现反跳现象。醇提物低剂量组T14和水提物中剂量组T21的血清DHBV DNA载量高于模型组(P<0.05),水提物/醇提物高、中、低剂量组T7、T28、P5的血清DHBV DNA载量与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3.药物对丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的影响:水提物高剂量组T7血清ALT活性低于模型组(P<0.05),水提物/醇提物高、中、低剂量组T14、T21、T28、P5血清ALT活性均低于模型组(P<0.05或P<0.01),水提物高剂量组T7血清ALT活性与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05),水提物高剂量组和醇提物高剂量组T28血清ALT活性与空白组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。水提物/醇提物高、中、低剂量组T21和T28的血清ALT活性均低于给药前(T0)(P<0.05或P<0.01),水提物高、中、低剂量组和醇提物高、中剂量组在停止给药后血清ALT活性仍低于T0(P<0.05或P<0.01),但较T28稍有回升(P<0.05)。4.药物对天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性的影响:拉米夫定组、水提物高剂量组和醇提物高剂量组在T28血清AST活性低于模型组(P<0.05),其余治疗时间水提物/醇提物高、中、低剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。5.鸭肝组织主要的病理学改变类型为汇管区炎细胞浸润、胞浆疏松化和点灶状坏死,各实验组肝组织病变程度差异有统计学意义(x2=30.476,P<0.01)。拉米夫定组、水提物高剂量组和醇提物高剂量组鸭肝组织病理学改变程度与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),水提物高剂量组的肝组织病理学改变程度轻于水提物低剂量组(P<0.05),醇提物高剂量组的肝组织病理学改变程度轻于醇提物中剂量组和醇提物低剂量组(P<0.05)。结论1.地菍水取物和醇提物均无明显的抗鸭乙肝病毒作用。2.地菍水提物和醇提物对麻鸭感染DHBV引起的肝损伤具有保护作用。