【摘 要】
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【研究背景与目的】代谢相关脂肪性肝病（metabolic associated fatty liver disease,MAFLD）是世界范围内肝病的常见原因,已经成为加重慢性疾病经济负担的原因之一。MAFLD可从单纯性脂肪肝进一步发展为纤维化。研究发现肝纤维化严重程度是人类MAFLD中肝脏相关发病率和死亡率的独立预测因素。钠葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（sodium-glucose co-tran
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【研究背景与目的】代谢相关脂肪性肝病（metabolic associated fatty liver disease,MAFLD）是世界范围内肝病的常见原因,已经成为加重慢性疾病经济负担的原因之一。MAFLD可从单纯性脂肪肝进一步发展为纤维化。研究发现肝纤维化严重程度是人类MAFLD中肝脏相关发病率和死亡率的独立预测因素。钠葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（sodium-glucose co-transporter 2 inhibitor,SGLT2i）是治疗2型糖尿病的新型口服降糖药,有临床研究发现SGLT2i除能显著降低血糖外,还能改善MAFLD患者的肝纤维化。但SGLT2i改善肝纤维化的具体机制尚未阐明。我们前期研究发现SGLT2i药物恩格列净（empagliflozin,EMPA）能够改善血糖、胰岛素抵抗以及肝纤维化,但对MAFLD晚期肝纤维化的作用机制尚不清楚。本研究目的是探讨EMPA对MAFLD晚期肝纤维化的作用机制。【研究方法】（1）我们前期研究已构建好三种MAFLD模型,并设置好对照组。在模型组以及对照组中分别给予EMPA以及等量的助溶剂（羟乙基纤维素）处理四周,收集小鼠肝脏组织并进行HE、Masson和天狼星红染色。模型一分组:CD（普通饮食）;CD+EMPA;HFD（高脂饮食）;HFD+EMPA。模型二分组:WT（野生型小鼠）;WT+EMPA;ob/ob（瘦素缺乏小鼠）;ob/ob+EMPA。模型三分组:ob/ob+MCD（胆碱蛋氨酸缺乏饮食）;ob/ob+MCD+EMPA。（2）使用qPCR筛选小鼠肝脏中microRNAs（miRs）的差异性表达;提取原代肝细胞以及间质细胞并使用qPCR检测miR-34a的表达;使用qPCR以及Western Blot或者免疫组化筛选出miR-34a调控肝纤维化的主要信号通路。（3）miR-34a mimic、inhibitor以及mimic NC、inhibitor NC分别转染人肝星状细胞LX-2,并用qPCR、Western Blot以及免疫荧光检测TGFβ信号通路转录水平以及蛋白水平的表达。（4）使用在线预测网站Targetscan以及miRDB预测miR-34a的靶点。并在MAFLD模型小鼠肝脏中用qPCR、WB以及免疫组化验证预测靶点的表达情况。构建Grem2以及Grem2结合位点突变质粒,将之转染293T细胞,并使用miR-34a mimic处理。使用双荧光素酶报告基因检测miR-34a与Grem2的结合情况。【研究结果】1、EMPA显著改善小鼠肝脏纤维化,且降低MAFLD小鼠肝脏miR-34a的转录水平。2、MiR-34a的预测靶点为Grem2,EMPA干预后小鼠肝脏Grem2表达升高。3、EMPA干预显著下调TGFβ信号通路并改善肝纤维化。4、LX-2细胞过表达miR-34a显著抑制Grem2转录、并增加TGFβ信号通路相关基因的表达;抑制LX-2细胞中miR-34a则促进Grem2转录、并降低TGFβ信号通路的表达。这表明miR-34a靶向Grem2调控TGFβ信号通路。【研究结论】EMPA通过下调miR-34a继而靶向Grem2并抑制TGFβ信号通路改善代谢相关脂肪性肝炎。
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