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目的:通过检测伽玛刀照射猫脑额叶运动区皮质后该区星形胶质细胞(Astrocyte,AST)中胶质原纤维酸性蛋白(Glialfibrillary acidic protein,GFAP)和S-100蛋白表达的变化,探讨伽玛刀照射后脑部皮质的放射生物学反应及其作用机制,为临床上伽玛刀照射治疗癫痫等疾病选择合适剂量,减少不良反应,提供敏感监测指标,并为研究放射治疗后AST的损伤与修复提供部分理论依据。
方法:选取健康家猫45只,随机分为对照组、伽玛刀10Gv照射组和25Gy照射组,每组15只;麻醉后,将Leksell立体定向头架安装于猫头部,磁共振仪定位扫描,图像经计算机网络传至Gamma Plan系统制定治疗计划,靶区定位于右侧额叶,确定坐标后将猫头部固定于定位架上,用4 mm准直器实施照射,等剂量曲线为50%,边缘剂量为10Gy和25Gy。对照组安装头架,行磁共振扫描,不做伽玛刀照射。于伽玛刀照射后24小时、7天、14天每组随机选取5只动物处死,对其靶区取材,进行普通HE染色和免疫组化染色。免疫组化染色切片在普通光学显微镜下进行阳性细胞计数。所有数据采用均数±标准差(x±s),用SPSS10.0统计软件进行分析比较,以P<0.05为差异有显著性。
结果:所有试验动物均在伽玛刀照射后6~8小时后完全清醒,逐渐恢复饮食,未出现肢体偏瘫等症状。25Gy剂量组部分动物7天内轻度精神萎靡,7天后完全恢复正常。14天时MRI扫描和取材后脑组织均未发现明显坏死灶。光镜下HE染色观察:各剂量组14d内均未见神经元形态改变,而AST出现变化:随时间和剂量增加出现胞质退行性变、空泡变性,核固缩、核溶解的现象。 GFAP免疫组化结果:1、各组经伽玛刀照射后,GFAP的表达均有增强。10Gy剂量组和25Gy剂量组自照射后24小时始即有GFAP蛋白表达增高,7天、14天时GFAP表达亦有明显增高,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。2、各组伽玛刀照射后GFAP的表达均与时间成正相关,随时间推移表达增强。各时间点比较,差异具显著性(P<0.05)。3、伽玛刀照射后GFAP表达与剂量成正相关,随剂量增加表达增强。4、照射后24小时和7天时,10Gy剂量照射组与25Gy剂量组GFAP蛋白的阳性表达数随剂量增加有增高趋势,但经比较差别无显著性(P>0.05)。照射后14天, 25Gy剂量组GFAP的阳性表达数较10Gy组明显增高,经比较差异有显著性(P<0.05)。
结论:
1.边缘剂量10Gy和25Gy,等剂量曲线50%属伽玛刀治疗安全剂量。
2.伽玛刀照射猫正常额叶运动区皮质后14天内GFAP和S-100蛋白均有表达增强。
3.伽玛刀照射猫正常额叶运动区皮质后急性期的GFAP和S-100蛋白表达与照射剂量和时间成正相关。
4.伽玛刀10Gy剂量组和25Gy剂量组照射猫正常额叶运动区皮质14天内,S-100蛋白表达与GFAP蛋白相比,剂量相关性、组问差异更显著,提示S-100蛋白可能是放射性脑损伤急性期更敏感的指标。