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背景:近年来,大量研究发现不同长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lnc RNAs)在多种恶性肿瘤中存在特异性异常表达的现象,并且在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移等过程中可能起到重要的作用。我们前期研究利用lnc RNA基因芯片筛选出在胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中差异表达的长链非编码RNA分子CRNDE(colorectal neoplasia differentially expressed),但其在胰腺癌发生发展中的作用及机制仍尚不明确。目的:本研究旨在研究CRNDE对胰腺癌细胞增殖、凋亡与侵袭力的影响;探讨CRNDE介导Hippo-YAP通路在胰腺癌细胞恶性转化中的分子作用机制。方法:1.采用RT-PCR检测CRNDE在20对胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中及3种胰腺癌细胞株(As PC-1、PANC-1和Bx PC-3)中的表达情况;运用流式细胞及Transwell实验探讨下调CRNDE表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响。2.利用免疫组化检测胰腺癌组织中Hippo-YAP通路中的关键因子LAST1(large tumor suppressor gene 1)和YAP1(yes-associated protein)蛋白表达水平,并分析与CRNDE表达的关系;利用Western blot研究下调CRNDE表达对胰腺癌细胞LAST1和YAP1表达的影响,以验证CRNDE通过介导Hippo-YAP通路促进胰腺癌的发生发展的重要作用机制。结果:1.本研究通过RT-PCR检测20对手术切除的胰腺癌组织和癌旁正常胰腺组织中CRNDE的表达水平,结果证实CRNDE在胰腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常胰腺组织(P<0.05)。同时,研究还发现在胰腺癌细胞株As PC-1、PANC-1和Bx PC-3中,CRNDE的表达水平也有不同程度的升高。我们以表达水平最高的As PC-1细胞为研究对象,通过特异性si RNA干扰技术下调As PC-1细胞中CRNDE的表达水平,经流式细胞检测发现,下调CRNDE表达后As PC-1细胞的G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05),而其细胞凋亡率较对照组明显提高(P<0.05)。同时Transwell实验结果显示下调CRNDE表达后胰腺癌细胞侵袭能力受到明显抑制(P<0.05)。2.采用免疫组化检测Hippo-YAP通路中LAST1和YAP1的表达情况,结果发现LATS1蛋白在胰腺癌组织中表达水平较相应癌旁正常胰腺组织显著下降,同时伴随YAP1蛋白表达水平的升高。此外,直线回归分析显示CRNDE与LAST1和YAP1呈明显线性关系,其中CRNDE与LAST1呈负相关,CRNDE与YAP1呈正相关。Western blot检测提示下调胰腺癌As PC-1细胞CRNDE表达后,LATS1蛋白表达水平明显上调,而YAP1蛋白表达水平则下降。结论:1.研究结果发现在胰腺癌中存在CRNDE高表达的现象,CRNDE异常表达促进癌细胞的恶性生长、抑制癌细胞凋亡并且增强了癌细胞的侵袭力,初步证实CRNDE在胰腺癌发生发展中扮演促癌基因的角色。2.通过下调胰腺癌细胞中CRNDE表达水平,LATS1蛋白表达水平明显上调,YAP1蛋白表达水平下降,结果显示CRNDE可能介导Hippo-YAP信号通路在胰腺癌的发生发展中发挥重要作用。