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超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,简称SOD)(EC.1.15.1.1)系一类金属酶,广泛存在于生物体中。它能够催化超氧阴离子(O2.-)发生歧化反应,从而清除超氧阴离子。在生物体防御氧化损伤的过程中,发挥着重要作用。根据酶分子中所含金属辅基的不同,超氧化物歧化酶主要可分为CuZn-SOD(存在于真核生物中),Mn-SOD(存在于原核生物和真核生物中),Fe-SOD(存在于原核生物和高等植物的叶绿体中)等类型。疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)是一种广泛分布的嗜热真菌,其生长上限温度很高,产生的嗜热酶在高温条件下具有很高的活性和稳定性,目前已从该菌中分离纯化了热稳定的蛋白酶、几丁质酶和纤维素酶等。该菌在含有干酪素的培养基中,50℃条件下可以产生超氧化物歧化酶。本研究以疏绵状嗜热丝孢菌为材料,根据本实验室已获得的超氧化物歧化酶Mn-SOD基因的序列,通过RACE技术克隆得到了疏绵状嗜热丝孢菌的超氧化物歧化酶Mn-SOD的基因mnsod,该基因全长cDNA序列为791bp,包括654bp的ORF,编码217个氨基酸。该基因已在GenBank中注册,登录号为EU364837。将超氧化物歧化酶Mn-SOD的基因与酵母表达载体pPIC9K用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后体外连接构建了重组酵母表达载体pPIC9K/mnsod,转化巴斯德毕赤酵母获得了产Mn-SOD的酵母工程菌株MS-95。通过甲醇诱导,对酶液进行硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析获得了凝胶电泳均一的分子量约为27kDa的超氧化物歧化酶。表达的超氧化物歧化酶Mn-SOD的最适反应温度和pH分别为55℃和8.0,该酶具有良好的热稳定性;在pH值为7.0～9.0之间保持稳定的酶活性。