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目的:本实验目的是为放疗不敏感乳腺癌细胞(RBCC)寻找更合适的靶向治疗药物。方法:采用生物医学常用蛋白质印记、克隆形成、免疫荧光、流式细胞检测、彗星实验、DNA纤维实验以及动物实验模型,进行比较对照细胞及其经过长期离子射线照射之后形成的放疗不敏感乳腺癌细胞中DNA损伤应答的改变,进而观察CHK1抑制剂在联合放疗后或仅仅单药处理之后对细胞造成的不同影响。结果:DNA损伤修复蛋白ATR/CHK1/BRCA1/Ct IP在放疗不敏感乳腺癌细胞中出现高表达,并且在放疗不敏感乳腺癌细胞中同源重组(HR)的细胞修复机制被激活。虽然CHK1抑制剂AZD7762限制了同源重组的活性,但其并没有使放疗不敏感乳腺癌细胞恢复对放疗的敏感性。然而,在体内和体外试验中我们却发现AZD7762单药竟然明显的抑制了放疗不敏感乳腺癌细胞的生长。因此我们提出假说:CHK1抑制剂可以通过释放原本被抑制的癌基因诱导的复制压力,进而特异性的杀死放疗不敏感乳腺癌细胞。我们发现相比对照组细胞,在放疗不敏感乳腺癌细胞中癌基因c-Myc/CDC25A/c-Src/H-ras/E2F1出现高表达的状态。同样,相比对照组细胞在放疗不敏感乳腺癌细胞中经过AZD7762处理之后DNA损伤明显增多,并且增加了复制起始点,从而消耗脱氧核苷酸而导致复制进行速度减慢,最终导致细胞死亡。结论:虽然在放疗不敏感乳腺癌细胞中激活了癌基因通路,使得该细胞中复制压力出现明显增高,但其却通过依赖CHK1信号转导而维持正常存活。因此,我们的研究通过使用CHK1抑制剂释放上调的复制压力,使细胞累积过多损伤的DNA无法正常修复进而特异性的杀死放疗不敏感乳腺癌细胞。在今后临床治疗中出现的乳腺癌放疗不敏感的问题,提示使用CHK1作为其靶向治疗药物的可能性。