论文部分内容阅读
目的构建MADB-106大鼠乳腺癌细胞转移性骨癌痛-鞘内穿刺置管模型,将成功构建的经人前脑啡肽基因(hPPE)修饰的人胚胎肾(HEK293)细胞株移植注入大鼠鞘内,通过大鼠行为学及其脑脊液中亮氨酸脑啡肽(L-EK)含量的改变,探讨此细胞对大鼠骨癌痛的镇痛效果。方法选择雌性SD大鼠,在大鼠左后肢胫骨打孔后,向大鼠胫骨所打孔内注射MADB-106大鼠乳腺癌细胞5μl,通过观察造模部位在X线下的变化情况,筛选骨癌痛模型造模成功的大鼠40只,根据蛛网膜下隙微创置管法造模,并随机分为两组,移植组(鞘内注射pLV-Ubc-hPPE/HEK293细胞悬液)和对照组(注射空白对照液),从鞘内移植细胞株第7天起,通过自由行走评分、热痛觉阈值和自发性缩足反射次数的行为学观察分别评估大鼠行走诱发痛、热痛觉过敏和疼痛情况,来对比细胞株移植前后,大鼠对痛觉的敏感程度。实验结束后冰浴收集大鼠脑脊液,通过放射免疫法检测人前脑啡肽的表达情况。结果1移植组大鼠自术后第25天起自由行走评分逐渐降低,两组大鼠自术后21天(移植hPPE/HEK293细胞7天)起各个时间点自由行走评分相比差异有统计学意义(P<0.001)；移植组自术后21天起出现热痛觉敏感性减弱,第25天热痛觉敏感性降低逐渐明显,两组大鼠自术后21天起各个时间点热痛觉阈值相比,差异有统计学意义(P<0.001)；移植组自术后21天起出现自发缩足反射次数逐渐减少,第25天起自发性缩足反射次数与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。2放射免疫法检测两组大鼠脑脊液中人前脑啡肽的表达情况：结果可见对照组检测到微量亮氨酸脑啡肽(L-EK),移植组检测到的L-EK含量明显高于对照组,相比差异有统计学意义(P<0.001),其表达量可用pg级浓度表示。结论SD-雌性大鼠鞘内移植经慢病毒转染hPPE修饰的HEK293细胞株在大鼠鞘内能够持续分泌人前脑啡肽,并对癌症引起的慢性癌性疼痛有较强的镇痛作用。