从氧化应激角度探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病蛋白尿的改善作用

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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy DN)已成为世界范围内严重危害人类健康的公共卫生问题之一。蛋白尿是DN主要的临床表现,是DN病情进展的独立危险因素和预测DN远期预后的重要临床指标。严格控制DN患者尿蛋白水平已成为延缓病情进展的基础治疗手段之一。而国内外众多学者也致力于控制DN患者蛋白尿来延缓DN的发展,并取得了一定的进展。本实验主要研究临床上疗效显著的益气养阴活血方对DN大鼠蛋白尿的影响及其氧化应激机制。方法:本实验选用健康雄性Wistar大鼠(SPF清洁级)90只,体重180-200g,购入后先适应性喂养1周,选择健康、状态良好,并检测血糖正常、尿蛋白定性试验阴性的大鼠列入观察。按随机分组法分为正常对照组和造模组。正常对照组不予手术处理,造模组行左侧肾脏结扎手术。2周后,所有组大鼠禁食12小时,将造模组的Wistar大鼠予单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30mg/kg体重,而正常对照组大鼠腹腔注射等体积上述缓冲液。注射STZ72h后,尾静脉采血,以非空腹血糖高于16.7mmol/L;尿量>原尿量150%;尿蛋白>30mg/24h者视为造模成功,列入观察对象。1周后,将成模大鼠编号并随机分五组,糖尿病肾病模型对照组,益气养阴活血方高、中、低剂量组,中药糖脉康对照组,每组15只。正常对照组8只。正常对照组喂以普通饲料,其他组喂以高能量饲料。4周后,按照体重喂以同容积的药物。给药前及给药第2和第4周,自大鼠尾尖采血,测血糖,同时将大鼠转入代谢笼内,禁食不禁水,收集24h尿液,于给药4周末麻醉动物,腹主动脉取血,离心后取血清,用全自动生化分析仪进行生化检测,同时取右侧肾脏,将右肾沿纵向切开,一半放入10%福尔马林里固定,进行病理学HE和MASSON染色,光镜下观察,另一半置液氮中保存,检测肾组织的蛋白含量、蛋白羰基含量和丙二醛的含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、琥珀酸脱氢酶、过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶的活性,检测肾组织线粒体ROS的含量和线粒体膜电位。从而观察益气养阴活血方对DN的治疗作用并从氧化应激方面探讨其作用机制。结果:1、益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠的精神、活动、毛色等一般状态具有一定的改善作用。2、益气养阴活血方能够在一定程度上降低糖尿病肾病大鼠的24小时尿蛋白。3、益气养阴活血方能够减轻DN大鼠肾小球基底膜的增厚,改善DN大鼠系膜区增宽及系膜基质的积聚.4、益气养阴活血方能明显抑制糖尿病肾病大鼠肾脏的蛋白羰基含量并且提高GSH-PX的活力,而肾组织的SOD、SDH和MDA与模型组相比均无明显差异。5、益气养阴活血方能够在一定程度上提高DN大鼠肾脏线粒体膜电位,能够降低DN大鼠肾脏线粒体ROS的含量。结论:益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠一般状态具有明显的改善作用,减少24小时尿蛋白排泄,改善肾脏病理变化,可以提高DN大鼠GSH-PX的活力,提高肾脏线粒体膜电位降低线粒体ROS。由此,本实验认为氧化应激机制可能是益气养阴活血方治疗DN的机制之一。
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