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链球菌病是目前对罗非鱼养殖危害最为严重的病害,呈全球流行,每年给世界罗非鱼养殖造成巨额经济损失,2009-2012年给中国罗非鱼养殖业造成的经济损失累计达16亿美元。近年该病在中国的流行发生了巨大变化,目前还未找到有效的预防控制措施。本论文对中国罗非鱼主要养殖省区广东、广西、海南、福建及云南近7年(2006-2012)链球菌病流行菌株分离鉴定、血清型与基因型分析、菌种更替原因及流行菌株免疫原性进行研究,旨在全面掌握该病病原在我国的流行变化情况；同时,论文通过重组酵母分泌表达获得罗非鱼热休克蛋白70(tHSP70),并在基因、细胞及机体水平探索了tHSP70在该病的免疫学功能。2006-2012年,研究从广西、广东、海南、福建和云南5省罗非鱼集中养殖区共分离到罗非鱼源链球菌临床菌株210株,建立了目前国内菌株来源最广、数量最多、数据最详的罗非鱼链球菌病原库；临床菌株鉴定表明我国罗非鱼链球菌病流行菌种已从过去(2008年前,91.30%)以海豚链球菌为主转变为现在(2009-2012,97.86%)以无乳链球菌为主；2009-2012年流行的无乳链球菌株存在Ia、Ib和Ⅲ型3种血清型,其中Ia(94.67%)为绝对优势血清型,各区域流行菌株血清型和PFGE基因型存在地域差异,并且随时间发生变化；罗非鱼无乳链球菌流行菌株免疫原性与其血清型和PFGE基因型均有关联,很难筛选获得1株疫苗候选菌株可以保护相同血清型内的所有基因型菌株；2008年初南方罕见持续低温天气和菌种致病力差异是我国罗非鱼流行菌种在2008年发生更替的直接原因。研究构建了罗非鱼HSP70蛋白高效、稳定的毕赤酵母分泌表达系统(KM71/pPIC9K/tHSP70),表达量达30mg/L。重组表达的tHSP70具有ATPase和结合蛋白多肽的生物学活性；tHSP70(100μg/mL)可显著增强罗非鱼腹腔巨噬细胞的贴壁和生长、NO释放及吞噬海豚链球菌菌体抗原能力；tHSP70(10μg/mL可极显著提高海豚链球菌菌体诱导罗非鱼淋巴细胞的增殖(P<0.01),并可减轻海豚链球菌胞外产物(ECP)对淋巴细胞增殖的抑制作用；基因表达分析显示,tHSP70可显著增强海豚链球菌体外诱导罗非鱼腹腔巨噬细胞IL-8、HSP70、 CXCR4和PGRN四个基因,以及罗非鱼外周血淋巴细胞ICER、PGK、 MMP9和MHCII四个基因的表达(P<0.01)；研究采用微粒包裹技术制备的罗非鱼海豚链球菌tHSP70-肽微粒疫苗口服免疫罗非鱼,第10d和20d的免疫保护率分别为76.78%和69.09%,极显著高于其它口服免疫对照组(P<0.01)。本研究全面掌握了近7年我国罗非鱼链球菌病发病规律及其病原分布与变化特征,并阐明了2008年流行菌种更替原因,为该病科学防控和疫苗研发应用提供了直接依据；研究从基因、细胞和机体水平探索了tHSP70在罗非鱼链球菌病中的免疫学功能,初步证实tHSP70且有很好的免疫佐剂功能,为今后利用HSP70开发新型口服鱼类疫苗奠定了基础。