大豆异黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织NF-kB和TNF-α表达的影响

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目的:观察大豆异黄酮(Soybean isoflavone,SI)对大鼠全脑缺血再灌注损伤脑组织NF-кB和TNF-α表达的影响,探讨SI对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响及其可能机理。  方法:健康雄性 Sprage-Dawley(SD)大鼠50只随机分为5组:假手术组(S组,n=10只),缺血再灌注组(IR组,n=10只),缺血再灌注+SI低剂量组(IR-L-SI组,n=10,60mg/kg bw.d),缺血再灌注+SI中剂量组(IR-M-SI组,n=10,120mg/kg bw.d),缺血再灌注+SI高剂量组(IR-H-SI组,n=10,240mg/kg bw.d),S组和IR组大鼠每天用生理盐水灌胃;灌胃周期21天,于第22天手术,术前一天停止给予饮食。S组只做手术,并在脑电图下动态监测120min,其余各组参照三血管阻断法在脑电图监护下建立大鼠全脑缺血再灌注模型,全脑缺血60min,再灌注60min,所有模型成功的大鼠试验结束后20%乌拉坦腹腔注射处死,断头取脑,左侧大脑皮层速于-20℃冰箱保存用于测定生化指标NO含量、TNOS及iNOS活性、SOD活性、MDA含量。取左侧大脑皮层约100mg脑组织速至-80℃冰箱保存,RT-PCR法检测NF-кBp65 mRNA。右侧脑组织放入10%的福尔马林固定,距额极2.5mm处向后切取2.0mm脑组织,制成石蜡切片,HE染色观察脑组织形态变化,免疫组化法检测NF-kB和TNF-α的表达。  结果:(1)脑组织病理学检查:IR组大鼠脑神经细胞及胶质细胞均肿胀,变性,胞膜不清,胞核固缩,神经纤维网空泡样改变,间质水肿明显,细胞及血管周围间隙增大。与IR组相比,各用药组的大鼠脑组织病变均明显改善,胞核固缩减轻,细胞及血管周围间隙明显变窄,间质疏松减轻。  (2)SI对大鼠全脑缺血再灌注损伤的SOD活性及MDA含量的影响:IR组SOD活性明显低于S组(P<0.01),各用药组较IR组均有升高,差异显著, IR-M-SI组及 IR-H-SI组(P<0.01),IR-L-SI组(P<0.05),有统计学意义。IR组MDA含量明显高于S组(P<0.01),各用药组较IR组均有降低,IR-L-SI组、IR-M-SI组(P<0.01),有统计学意义。SI对大鼠全脑缺血再灌注损伤的NO含量、TNOS及iNOS活性的影响:IR组NO含量明显高于S组(P<0.01),各用药组较IR组均有降低,差异显著,IR-L-SI组及IR-M-SI组(P<0.01),IR-H-SI组(P<0.05),有统计学意义。IR组TNOS及iNOS活性明显高于S组(P<0.01),各用药组较IR组均有降低(P<0.01),有统计学意义。  (3)大鼠脑组织切片示:IR组NF-κB、TNF-α阳性细胞数目较S组明显升高(P<0.01),SI用药组表达NF-κB、TNF-α阳性细胞数目均减少,较IR组差异显著(P<0.01)。NF-кB在半定量分析RT-PCR中可见SI各用药组亮度减弱。  结论:1.脑组织NO含量增加,TNOS、iNOS活性升高,SOD活性降低和MDA含量升高,NF-кB和TNF-α高表达参与大鼠全脑缺血再灌注损伤。  2.大豆异黄酮对再灌注后脑组织 NF-kB和 TNF-α的表达具有明显的抑制作用,减轻再灌损伤后脑组织的炎症反应,对脑细胞有保护作用。  3.大豆异黄酮可能通过提高SOD活性,降低NOS、iNOS活性,减少NO及MDA含量,减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤。IR-M-SI组效果好。
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